 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2202 | 回復(fù): 6 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
linxiaolin08捐助貴賓 (初入文壇)
|
[求助]
關(guān)于雙酶切后連接轉(zhuǎn)化，酶切驗證切不開。 已有3人參與
|
|
|
各位蟲友，大家好，我的目的基因是1119bp，連接體系應(yīng)該是沒問題的，我們實驗室用的都是25微升的體系。 第一次我做了EcoRI和XhoI酶切位點： 該做的對照我都做了，但是實驗失敗，最后得出的結(jié)論是以下原因： 1、基因沒有加上酶切位點導致我沒切開，連不上。2、我的連接酶失效了不好使。 連接酶不好使的可能性很小。 但是我想換一下酶，所以做了第二次試驗： 第二次換了酶切位點以后我選擇的是EcoRI和SalI這兩個酶，目的基因PCR條帶沒問題，做過單酶切，也都沒問題，但是菌液PCR有條帶，質(zhì)粒PCR后沒有條帶，也就是說我還是沒連上，那我分析了一下，不應(yīng)該這么湊巧是酶的問題，是否是我設(shè)計的引物出現(xiàn)問題，例如這段引物就是對酶切位點有影響導致切不開，所以想換引物。但是這段序列很特別，引物也是好不容易找的，所以不到萬不得已我是不想換引物的，各位蟲友有什么好的建議么？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有242人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- Takara的BamHI和XhoI雙酶切求助
已經(jīng)有6人回復(fù)
- EcoR1酶切體系
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 關(guān)于雙酶切的酶的失活問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 基因組酶切問題！急！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- pMD18-T載體連接了目的片段后雙酶切鑒定出現(xiàn)了好多條帶 怎么回事?
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 酶切、連接和轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有9人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物直接雙酶切后電泳看不到條帶
已經(jīng)有30人回復(fù)
- 酶切后的補平連接
已經(jīng)有9人回復(fù)
- pET28a雙酶切后連接目的基因，什么也不長。。。
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 連接檢測時雙酶切總是切不開
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 雙酶切沒有切開，怎么回事啊
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 酶切酶連轉(zhuǎn)化后單克隆檢測不對
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 連接產(chǎn)物雙酶切
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 雙酶切，切不下來
已經(jīng)有19人回復(fù)
- （侯氏出品）雙酶切連接反應(yīng)之全攻略
已經(jīng)有89人回復(fù)
- 雙酶切，連接，轉(zhuǎn)化問題
已經(jīng)有30人回復(fù)
- 雙酶切粘性末端連接不上
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 酶切后未純化連接出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 雙酶切連接表達載體，兩個月都沒做出來，問題到底出在哪里呢~？求指點
已經(jīng)有52人回復(fù)
- 【求助/交流】為什么酶切總是切不開？
已經(jīng)有12人回復(fù)
yesucao
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 金幣: 3877.1
- 散金: 45
- 紅花: 6
- 帖子: 374
- 在線: 203.4小時
- 蟲號: 810829
- 注冊: 2009-07-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
5樓2014-12-01 15:58:33
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時
- 蟲號: 819723
- 注冊: 2009-07-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學
2樓2014-12-01 10:20:20
linxiaolin08
捐助貴賓 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7.5
- 紅花: 1
- 帖子: 41
- 在線: 6.6小時
- 蟲號: 3415126
- 注冊: 2014-09-14
- 專業(yè): 生物化學
3樓2014-12-01 10:48:27
4樓2014-12-01 15:49:44
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +5 | 匹克i 2026-03-23 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +10 | Zhao anqi 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +4 | 收到VS 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | 孅華 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學358分，求調(diào)劑！
+4
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +12 | 申子申申 2026-03-19 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿211 +3 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +6 | shansx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 260求調(diào)劑 +3 | 朱芷琳 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +4 | plum李子 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | .m.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 南昌大學材料專碩311分求調(diào)劑 +6 | 77chaselx 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學，327分，材料與化工085600 +9 | Ncdx123456 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 申子申申 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學材料求調(diào)劑，總分315（英一） +5 | sbdksD 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑，科研經(jīng)歷豐富 +3 | 牛奶很忙 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086500 325 求調(diào)劑 +3 | 領(lǐng)帶小熊 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|