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xuanyuanhu木蟲 (著名寫手)
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[求助]
pGEX-4T-1載體 已有1人參與
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| pGEX-4T-1表達(dá)載體，在大腸桿菌中的表達(dá)效果如何？對于大蛋白（>100kDa）呢？膜蛋白呢？急求，。。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
| pGEX4T-1是常見的原核表達(dá)載體，在大腸桿菌中能用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)出帶有GST tag的融合蛋白，用親和層析純化可以得到純度很高的目的蛋白。一般來說，由于啟動子不同，pGEX系列載體在大腸桿菌中的表達(dá)量不如pET系列載體的高，但是由于作為tag的GST具有不錯的維持蛋白穩(wěn)定及增加溶解度的能力，因此表達(dá)出的可溶性蛋白（即折疊結(jié)構(gòu)正確的蛋白）也不一定就比pET系列少。對于大分子量蛋白來說，鑒于上述GST優(yōu)點(diǎn)，可以嘗試純化一下，但大蛋白本來折疊正確的難度就大，tag的優(yōu)化作用很有限，最終能否純化出來還是要看蛋白自身的屬性。至于你說的膜蛋白嘛，呃，只能說載體已經(jīng)不怎么重要了，因?yàn)槠毡楹茈y純化，選什么載體要看你的后續(xù)純化路線。 |
2樓2015-01-21 01:25:44
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