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tingyue678新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
PCR結(jié)果只有引物二聚體的條帶，沒(méi)有產(chǎn)物 已有5人參與
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| 做PCR結(jié)果只有引物二聚體條帶，沒(méi)有產(chǎn)物，請(qǐng)教大神可能是什么原因造成的。我做的是釀酒酵母的基因組。 |
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2樓2015-01-08 21:26:26
3樓2015-01-09 02:14:14
18761615793
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
小蟲(chóng)
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【答案】應(yīng)助回帖
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您好，很高興 結(jié)果只有引物二聚體，但是沒(méi)有產(chǎn)物，至少引物之間還能合成雙鏈說(shuō)明引物是沒(méi)問(wèn)題的， 那么原因可能有 1）模板降解了，沒(méi)有模板無(wú)法合成雙鏈 ，所以你得確定你的模板有沒(méi)有降解，重新提取模板再操作一遍 2）酶的特異性太差了，室溫下，酶活性未被徹底封閉，酶還是有活性的，所以指導(dǎo)了引物與引物結(jié)合，在溫度升到95℃變性的時(shí)候，卻沒(méi)有引物和模板配對(duì)，也無(wú)法擴(kuò)增出產(chǎn)物的。如果使用的是普通Taq酶的話(huà)，可能是操作上慢了些，或是沒(méi)有在低溫下進(jìn)行操作，如果都有的話(huà)，那就是酶的性能太差，所以要找一種室溫下酶活性完全封閉的酶，建議換成熱啟動(dòng)Taq酶，我擴(kuò)增結(jié)束后沒(méi)有二聚體也沒(méi)有非特異性產(chǎn)物，市場(chǎng)上有很多賣(mài)的，可以找點(diǎn)便宜的。最好找化學(xué)修飾的，封閉更徹底，而且無(wú)動(dòng)物性DNA污染。 我的推薦：http://cn.promega.com（效果好，價(jià)格貴的） http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html（效果也不錯(cuò)，價(jià)格適中） 還有TAKARA（它的網(wǎng)站正在改版，目前還沒(méi)有信息 ） 呵呵 希望對(duì)你有所幫助哦 |
4樓2015-01-09 10:16:26
xmclql
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5樓2015-01-09 17:28:49
曼舞流蘇
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