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PCR結果只有引物二聚體的條帶，沒有產(chǎn)物 已有5人參與
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| 做PCR結果只有引物二聚體條帶，沒有產(chǎn)物，請教大神可能是什么原因造成的。我做的是釀酒酵母的基因組。 |
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2樓2015-01-08 21:26:26
3樓2015-01-09 02:14:14
18761615793
木蟲 (正式寫手)
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您好，很高興 結果只有引物二聚體，但是沒有產(chǎn)物，至少引物之間還能合成雙鏈說明引物是沒問題的， 那么原因可能有 1）模板降解了，沒有模板無法合成雙鏈 ，所以你得確定你的模板有沒有降解，重新提取模板再操作一遍 2）酶的特異性太差了，室溫下，酶活性未被徹底封閉，酶還是有活性的，所以指導了引物與引物結合，在溫度升到95℃變性的時候，卻沒有引物和模板配對，也無法擴增出產(chǎn)物的。如果使用的是普通Taq酶的話，可能是操作上慢了些，或是沒有在低溫下進行操作，如果都有的話，那就是酶的性能太差，所以要找一種室溫下酶活性完全封閉的酶，建議換成熱啟動Taq酶，我擴增結束后沒有二聚體也沒有非特異性產(chǎn)物，市場上有很多賣的，可以找點便宜的。最好找化學修飾的，封閉更徹底，而且無動物性DNA污染。 我的推薦：http://cn.promega.com（效果好，價格貴的） http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html（效果也不錯，價格適中） 還有TAKARA（它的網(wǎng)站正在改版，目前還沒有信息 ） 呵呵 希望對你有所幫助哦 |
4樓2015-01-09 10:16:26
xmclql
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曼舞流蘇
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6樓2015-01-12 11:02:08
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7樓2017-05-12 16:40:56
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