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[交流]
關(guān)于融合PCR 已有4人參與
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我現(xiàn)在正在做，也設(shè)計了兩對引物，中間的重復的堿基有700多bp，請問這樣能做成功嗎？對結(jié)果有影響嗎？ 望做過的大神指點一下 |
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2樓2015-01-19 13:32:45
3樓2015-01-19 13:56:49
18761615793
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2015-01-26 10:01:54
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| 3000bp不算長啊 ,擴增不出來？我想可能是酶的原因，普通的Taq酶可能擴增不了，換成熱啟動Taq酶，3000bp的也見不著用長片段酶擴增，大于10kb的采用長片段酶擴增，小于10kb的熱啟動Taq酶足夠擴增出來http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html |
4樓2015-01-20 08:51:34
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熱啟動Taq酶，就是溫度達到95攝氏度了，酶活才能啟動，PCR才能擴增，這就避免了在預(yù)變性或者在我們配置反應(yīng)體系的時候酶就發(fā)揮活性，導致引物二聚體或者其他非特異性條帶產(chǎn)生。 TAKAR 的rTaq酶就是普通的Taq酶啊，EXrTaq酶就是稍具保真性的普通Taq酶（可以說是一般的保真酶吧，呵呵）。rTaq擴增不出來很正常的，相反的如果不是對擴增要求十分精確如突變檢測等（涉及到一個堿基的），不建議使用保真性的酶，它具有保真性可以切掉你錯配的堿基同樣也可能會將你的模板（引物）降解掉，導致什么都擴增不出來。所以，一般PCR熱啟動酶足夠了，不會產(chǎn)生二聚體也不會降解模板或是引物。http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html第一段有原理， |
8樓2015-01-26 10:50:42
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