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[交流]
大分子量蛋白WESTERN BLOT問題討論與求助
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請問，有沒有人做過140-220KD的蛋白，大概條件是什么樣的？需要注意什么？ 我現(xiàn)在做140KD-220KD蛋白，一直做不出來，但是GAPDH還是可以出來。剛開始轉(zhuǎn)膜不好，現(xiàn)在轉(zhuǎn)膜后，GEL考染后基本都轉(zhuǎn)到了膜上，但是目的蛋白依舊沒條帶，泳道曝光長了就全部糊掉，感覺有又是沒有。 現(xiàn)在想問的問題是：1、β-巰基乙醇的濃度加錯了，會不會造成蛋白分不開？比如38KD和42KD的就會連上？單獨孵育兩個抗體，相同的位置都有條帶，一起孵育的話，條帶加粗。 2、β-巰基乙醇的濃度會不會是造成泳道糊掉的原因？ 3、在pcr儀中denature是不是不徹底？95° 6min ps:一抗沒問題，濃度也加大了。并且應(yīng)該是有目的蛋白的。 求大神指點，萬分的感謝�。�！ |
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2樓2016-05-27 13:02:28
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