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renfan1990新蟲 (初入文壇)
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跑pcr總是跑不出來(lái) 求大神指教啊 已有3人參與
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前面123孔是用同一對(duì)引物，其中1是空白，目的片段為2.8k；456也是用同一對(duì)引物，4為空白,目的片段為4.6k；789也是用同一對(duì)引物，7為對(duì)照，目的片段為5k；maker為2000plus。maker之后的前兩個(gè)孔是用與123一樣的引物跑的，目的片段2.8k左右，只是酶用的是 tsingke I-5™ 2X High-Fidelity Master Mix 擴(kuò)增的 。后面兩個(gè)孔不用管，只需要前面幾個(gè)。求大神指導(dǎo)，怎么辦，引物已經(jīng)換了好幾對(duì)了 ，就是擴(kuò)不出來(lái)。謝謝！ 7B52A3783CC65D956C6D47A05EA833DE.jpg |
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hanxiaominhu
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3樓2015-04-03 08:15:18
yangyang1991
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-04-03 22:50:38
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-04-03 22:50:38
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那條亮帶不是你的目的片段嗎？引物換幾對(duì)了還是這樣的話，就別換了，巢式也不是很好做的，5kb左右的片段對(duì)于一般的酶可能難以擴(kuò)增了，也沒必要使用LA Taq 酶，一般的熱啟動(dòng)聚合酶就行 注意選酶吧，可以參考http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html |
4樓2015-04-03 09:51:42
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