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BamH 1 和Pst 1 酶切后，用什么酶補齊5‘和3’ 末端 已有1人參與
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| 如題，我有一個DNA片段，是用BamH 1 和Pst 1 酶切的，這樣就產(chǎn)生了5‘和3’粘性末端。接下來我想用這兩個酶酶切后的產(chǎn)物與T載體連接，這樣就需要把酶切后的粘性末端補齊了。但是我不知道該用什么酶來補齊3‘和5’末端。希望大家能幫幫我。 |
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我欲乘風(fēng)歸去
木蟲 (正式寫手)
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2樓2015-04-03 16:23:32
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【答案】應(yīng)助回帖
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用T4 DNA polymerase，既可以補平5‘粘性末端，又可以切去3’粘性末端。 我一般用都是Fermentas的T4 DNA polymerase，貨號EP0061。 1.Prepare the following reaction mixture: 5X reaction buffer 4 μL Linear DNA or PCR product 1 μg dNTP Mix, 2 mM each (#R0241) 1 μL (0.1 mM final concentration) T4 DNA Polymerase 0.2 μL (1 U) Water, nuclease-free (#R0581) to 20 μL 2.Mix thoroughly, spin briefly and incubate at 11°C for 20 min or at room temperature for 5 min. 3.Stop the reaction by heating at 75°C for 10 min. |
3樓2015-04-07 09:07:37
4樓2018-04-04 12:24:17
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