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BamH 1 和Pst 1 酶切后,用什么酶補(bǔ)齊5‘和3’ 末端 已有1人參與
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| 如題,我有一個(gè)DNA片段,是用BamH 1 和Pst 1 酶切的,這樣就產(chǎn)生了5‘和3’粘性末端。接下來我想用這兩個(gè)酶酶切后的產(chǎn)物與T載體連接,這樣就需要把酶切后的粘性末端補(bǔ)齊了。但是我不知道該用什么酶來補(bǔ)齊3‘和5’末端。希望大家能幫幫我。 |
木蟲 (正式寫手)

銀蟲 (初入文壇)
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用T4 DNA polymerase,既可以補(bǔ)平5‘粘性末端,又可以切去3’粘性末端。 我一般用都是Fermentas的T4 DNA polymerase,貨號EP0061。 1.Prepare the following reaction mixture: 5X reaction buffer 4 μL Linear DNA or PCR product 1 μg dNTP Mix, 2 mM each (#R0241) 1 μL (0.1 mM final concentration) T4 DNA Polymerase 0.2 μL (1 U) Water, nuclease-free (#R0581) to 20 μL 2.Mix thoroughly, spin briefly and incubate at 11°C for 20 min or at room temperature for 5 min. 3.Stop the reaction by heating at 75°C for 10 min. |
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