 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3629 | 回復: 41 | |||
黃xia金蟲 (小有名氣)
|
[交流]
蛋白純化問題，希望大家給我支支招，成分感謝 已有8人參與
|
||
| 我的蛋白70多KD，上清表達，表達量還可以，在C端加了6His標簽，用生工的Ni柱填料掛柱純化，洗脫后，洗脫液中無目的蛋白，只有雜蛋白，目的蛋白在流穿液當中，說明沒掛上，（平衡緩沖液pH8.0，蛋白的等電點4.6左右，上樣流速嘗試過0.4和0.5ml/min），由于沒掛上，打算用切非變性膠的方式純化，來做后續(xù)實驗，但將切下的膠電透濃縮后，跑SDS-PAGE分析，有很多雜帶，目的條帶的量也少，與雜帶量差不多，在切的過程中，有時候還切不到自己的目的蛋白，怎么辦呀，我已經(jīng)就純化蛋白這個問題做了很久了，還沒啥進展，希望各位有經(jīng)驗的親給我一些建議，謝謝謝謝........無數(shù)個謝謝。 |
回復此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有268人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有6人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有3人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 小白求助純化酶經(jīng)驗
已經(jīng)有39人回復
- 一個有關(guān)用液相色譜分離純化的問題
已經(jīng)有21人回復
- 蛋白酶解實驗，做底物濃度因素時，關(guān)于加酶的問題？
已經(jīng)有7人回復
- 請教一個農(nóng)藥有效成分含量測定的問題，謝謝！
已經(jīng)有4人回復
- 求助:癌細胞糖蛋白的提取？
已經(jīng)有3人回復
- 肝臟勻漿提蛋白遇到問題，求助��！
已經(jīng)有4人回復
- 畢赤酵母表達時的雜蛋白問題
已經(jīng)有16人回復
- 黃芩中主要化學成分的紫外吸收波譜
已經(jīng)有5人回復
- BSA做考馬斯亮藍標準曲線的問題
已經(jīng)有14人回復
- 膠原蛋白的提取，我綜合的一個方案，麻煩大家看看，我有些疑問額。
已經(jīng)有27人回復
- 急求！��！胰蛋白酶水解魚精蛋白的方法！��！
已經(jīng)有11人回復
- 抗血清的純化方法
已經(jīng)有10人回復
- 最近純化融合蛋白，請問透析需要加PMSF嗎？
已經(jīng)有16人回復
- 蛋白雜質(zhì)的去除
已經(jīng)有19人回復
- 蛋白純化分離問題
已經(jīng)有19人回復
- Western Blot電泳蛋白質(zhì)外漏問題求助
已經(jīng)有22人回復
- 【求助】植物蛋白質(zhì)提取純化方法
已經(jīng)有12人回復
- 【求助】復方中三七有效成分（皂苷類）的提取分離純化方法
已經(jīng)有9人回復
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2015-05-10 22:54:42
黃xia: 金幣+5, ★★★很有幫助, 您好，由于看到蛋白沒掛上，所以心情受到重創(chuàng)就完全忘了拍照，在配平衡緩沖液的時候的確沒有加任何咪唑(50mMNaH2PO4·2H2O,300mMNaCl,NaOH調(diào)pH至8.0)，您提醒我了，我配20mMTris-HCl 時用了HCl和NaCl調(diào)pH值，難道是NaCl把蛋白沉淀掉了？我沒考慮過，也不太懂，柱子是沒問題，因為其他人用那柱子能掛上，樣品自身是否聚合我不知道，不過謝謝你的建議，我會考慮加變性劑試試，也檢測一下histag，真得非常感謝 2015-05-11 09:05:52
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2015-05-10 22:54:42
黃xia: 金幣+5, ★★★很有幫助, 您好，由于看到蛋白沒掛上，所以心情受到重創(chuàng)就完全忘了拍照，在配平衡緩沖液的時候的確沒有加任何咪唑(50mMNaH2PO4·2H2O,300mMNaCl,NaOH調(diào)pH至8.0)，您提醒我了，我配20mMTris-HCl 時用了HCl和NaCl調(diào)pH值，難道是NaCl把蛋白沉淀掉了？我沒考慮過，也不太懂，柱子是沒問題，因為其他人用那柱子能掛上，樣品自身是否聚合我不知道，不過謝謝你的建議，我會考慮加變性劑試試，也檢測一下histag，真得非常感謝 2015-05-11 09:05:52
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
5樓2015-05-10 19:13:25
★ ★ ★ ★ ★
黃xia: 金幣+5, 謝謝 2015-05-10 11:03:13
silicare: 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔 2016-01-12 15:37:16
黃xia: 金幣+5, 謝謝 2015-05-10 11:03:13
silicare: 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔 2016-01-12 15:37:16
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
2樓2015-05-09 22:49:39
781055707
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 291 (大學生)
- 金幣: 3118.2
- 散金: 46
- 紅花: 19
- 帖子: 2030
- 在線: 579.3小時
- 蟲號: 3046113
- 注冊: 2014-03-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2015-05-09 23:41:20
liuderong
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 310 (大學生)
- 金幣: 8202.1
- 紅花: 31
- 帖子: 582
- 在線: 142.1小時
- 蟲號: 1882145
- 注冊: 2012-07-07
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
4樓2015-05-10 12:00:10
781055707
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 291 (大學生)
- 金幣: 3118.2
- 散金: 46
- 紅花: 19
- 帖子: 2030
- 在線: 579.3小時
- 蟲號: 3046113
- 注冊: 2014-03-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
6樓2015-05-10 23:27:19
wanglele87
金蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 1127.4
- 散金: 5
- 紅花: 4
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 1074
- 在線: 314.2小時
- 蟲號: 3112453
- 注冊: 2014-04-03
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
7樓2015-05-11 01:16:06
黃xia
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1302.9
- 散金: 84
- 帖子: 129
- 在線: 47.9小時
- 蟲號: 2375758
- 注冊: 2013-03-25
- 性別: MM
- 專業(yè): 獸醫(yī)免疫學
8樓2015-05-11 09:14:27
黃xia
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1302.9
- 散金: 84
- 帖子: 129
- 在線: 47.9小時
- 蟲號: 2375758
- 注冊: 2013-03-25
- 性別: MM
- 專業(yè): 獸醫(yī)免疫學
9樓2015-05-11 10:53:41
★ ★
黃xia: 金幣+2 2015-05-12 22:58:02
黃xia: 金幣+2 2015-05-12 22:58:02
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
10樓2015-05-11 11:13:28
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 黃xia 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 +7 | α____ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學材料與化工303分求調(diào)劑 +4 | 為學666 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑總分293英一數(shù)二 +3 | 鋼鐵大炮 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +7 | 梁茜雯 2026-03-19 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學358分，求調(diào)劑！
+4
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 濤濤Wjt 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | 安憶靈 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | ytter 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | @taotao 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 要好好無聊 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +12 | 梁梁校校 2026-03-19 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學，327分，材料與化工085600 +9 | Ncdx123456 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +8 | 小材化本科 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學材料求調(diào)劑，總分315（英一） +5 | sbdksD 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 中南大學化學學碩337求調(diào)劑 +3 | niko- 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學 學碩 354求調(diào)劑211或者雙一流 +3 | 我想要讀研究生 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|