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黃xia金蟲 (小有名氣)
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[交流]
蛋白純化問題，希望大家給我支支招，成分感謝 已有8人參與
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| 我的蛋白70多KD，上清表達，表達量還可以，在C端加了6His標簽，用生工的Ni柱填料掛柱純化，洗脫后，洗脫液中無目的蛋白，只有雜蛋白，目的蛋白在流穿液當中，說明沒掛上，（平衡緩沖液pH8.0，蛋白的等電點4.6左右，上樣流速嘗試過0.4和0.5ml/min），由于沒掛上，打算用切非變性膠的方式純化，來做后續(xù)實驗，但將切下的膠電透濃縮后，跑SDS-PAGE分析，有很多雜帶，目的條帶的量也少，與雜帶量差不多，在切的過程中，有時候還切不到自己的目的蛋白，怎么辦呀，我已經(jīng)就純化蛋白這個問題做了很久了，還沒啥進展，希望各位有經(jīng)驗的親給我一些建議，謝謝謝謝........無數(shù)個謝謝。 |
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4樓2015-05-10 12:00:10
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