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xmccphx銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR產(chǎn)物加尾之后連接載體的問題 已有5人參與
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使用TOYOBO公司的KOD FX酶擴(kuò)增大約2.5kb的目的片段，由于要連到PMD-19T載體上，需要對PCR產(chǎn)物加尾。以下是我的實(shí)驗(yàn)步驟，請教一下有沒有問題： ①PCR產(chǎn)物跑膠后切膠回收；②將回收的產(chǎn)物使用rTAQ酶體系72℃水浴保溫30min加尾，③加尾后的產(chǎn)物4ul，soultion I 5ul，PMD-19T simple 1ul，混合后16℃水浴過夜。 連接之后的產(chǎn)物跑膠后發(fā)現(xiàn)片段大小只是原來擴(kuò)增的片段，請問是哪里出問題了？ |
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luwei13566
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5樓2015-05-12 22:59:18
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