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xuelvsnow新蟲 (小有名氣)
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[求助]
大家好，我想請教一下反相HPLC分析蛋白樣品時，前處理應(yīng)該怎能做 已有5人參與
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我之前用過C18，C8 流動相是 A：水 0.1%三氟乙酸 B：乙腈或甲醇 0.085%三氟乙酸 上樣是20ul， 今天發(fā)現(xiàn) 我的樣品在B液中析出大量沉淀 這樣會不會對我的柱子有影響啊，因為我發(fā)現(xiàn)上樣次數(shù)多了，檢測出的峰偏低 偏少了，甚至沒有什么峰了。 我的樣品前處理是：將1g樣品 溶于10ml PH7.0的50mMPBS中 超速離心取上清。 我想知道，如果我的樣品在有機相中沉淀，是不是前處理的問題，如有是的話應(yīng)該怎么辦呢；還是需要調(diào)節(jié)有機相�。� 圖片中分別是 水；乙腈；甲醇；乙醇；異丙醇；(純的) 100-200ul樣品 +1mL溶劑 離心后的效果 非常感謝大家的幫助!   IMG_0589.JPG |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xuelvsnow: 金幣+5, ★★★很有幫助, O(∩_∩)O謝謝你的文獻，給了我些思路。 2015-05-16 14:45:41
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xuelvsnow: 金幣+5, ★★★很有幫助, O(∩_∩)O謝謝你的文獻，給了我些思路。 2015-05-16 14:45:41
| TFA、甲醇、乙腈隨便一個都能使蛋白沉淀。我建議你查查文獻。這里給你找了一篇供參考。 |
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2015-05-15 11:41:49, 62.59 K
4樓2015-05-15 11:41:50
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【答案】應(yīng)助回帖
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archbishop: 化學化工區(qū)禁止留下聯(lián)系方式。 2015-05-15 13:12:09
xuelvsnow: 金幣+4, ★★★很有幫助, O(∩_∩)O謝謝 我的柱壓沒有怎么變好像 2015-05-16 14:44:38
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archbishop: 化學化工區(qū)禁止留下聯(lián)系方式。 2015-05-15 13:12:09
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| 純的有機相出現(xiàn)沉淀應(yīng)該算是正�，F(xiàn)象吧，而且在洗脫濃度是也不是純有機相相呀，你又不是用純有機相洗脫，至于為什么你的峰會越來越矮，不好說，有沒有可能存在降解。。。。。還有你的柱壓升高了么，樣品在色譜柱析出，柱壓應(yīng)該會有反應(yīng)才是。。。 |
6樓2015-05-15 12:40:42
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