版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門版塊排行榜

北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

返回列表

當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖

青蘋果QT

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
金幣: 2377.6
散金: 65
帖子: 148
在線: 91.3小時(shí)
蟲號(hào): 1961342
注冊(cè): 2012-08-29
性別: MM
專業(yè): 植物生理與生化

[求助] 載體自連問(wèn)題已有3人參與

如何避免載體自連？
雙酶切，然后連接，但是有時(shí)候會(huì)自連
求好方法
謝謝

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有219人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)
留學(xué)--博士招生已經(jīng)有16人回復(fù)
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限已經(jīng)有4人回復(fù)
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

克隆的片段連不上T載體怎么回事？？？已經(jīng)有21人回復(fù)
pMD-19T載體與目的片段的連接問(wèn)題已經(jīng)有34人回復(fù)
與PMD-19T連接問(wèn)題已經(jīng)有22人回復(fù)
目的片段和載體連接一直不上已經(jīng)有24人回復(fù)
pGEM-T載體連接大片段目的基因需要考慮的問(wèn)題已經(jīng)有14人回復(fù)
請(qǐng)教pcDNA3.1上酶切位點(diǎn)的問(wèn)題已經(jīng)有6人回復(fù)
雙酶切后如何才能讓載體自連？已經(jīng)有6人回復(fù)
單酶切后的載體和目的片段是否都需要去磷酸化已經(jīng)有4人回復(fù)
載體去磷酸化后的回收問(wèn)題已經(jīng)有21人回復(fù)
合成的引物直接退火形成粘性末端后連入載體已經(jīng)有13人回復(fù)
長(zhǎng)片段連接問(wèn)題已經(jīng)有14人回復(fù)
T載體連接不上去已經(jīng)有26人回復(fù)
克隆基因?yàn)槭裁匆恢边B不到載體上已經(jīng)有11人回復(fù)
目的片段與載體連接后無(wú)法檢測(cè)出已經(jīng)有7人回復(fù)
載體單酶切后去磷酸化還會(huì)自連嗎？已經(jīng)有5人回復(fù)
虛心請(qǐng)教關(guān)于平—粘末端的連接問(wèn)題已經(jīng)有18人回復(fù)
構(gòu)建pBI121表達(dá)載體，目的基因與載體連接不上已經(jīng)有54人回復(fù)
PCR產(chǎn)物與T載體連不上求助已經(jīng)有29人回復(fù)
【求助/交流】關(guān)于T載體連接問(wèn)題已經(jīng)有22人回復(fù)
【求助/交流】pCAMBIA1301載體已經(jīng)有7人回復(fù)

1樓 2015-05-23 13:44:43

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木蟲 (著名寫手)

應(yīng)助: 69 (初中生)
金幣: 5116.5
紅花: 18
帖子: 1048
在線: 441.4小時(shí)
蟲號(hào): 1427657
注冊(cè): 2011-10-05
性別: MM
專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

載體自連一般都會(huì)發(fā)生，只是效率高低而已。如果兩個(gè)酶切位點(diǎn)離得很近，就更容易發(fā)生切不干凈的問(wèn)題。我感覺(jué)最好的方法是從已經(jīng)構(gòu)建好的載體上切下來(lái)，然后再膠回收。這個(gè)對(duì)于我來(lái)說(shuō)最好用。

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2015-05-24 06:13:20

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 5 個(gè)回答

BioChen

銀蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 93 (初中生)
金幣: 83.8
紅花: 7
帖子: 386
在線: 107.4小時(shí)
蟲號(hào): 3168808
注冊(cè): 2014-04-28
專業(yè): 生物信息學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

懷疑人生，不如懷疑假貨！
雙酶切自連率非常低，你檢測(cè)下載體是否切干凈咯。
如果無(wú)論怎么做都切不干凈，堅(jiān)決跟老師報(bào)告酶不行了，一定要堅(jiān)決哦

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2015-05-23 16:06:25

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

erland21411

鐵蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
金幣: 167.2
紅花: 2
帖子: 54
在線: 7小時(shí)
蟲號(hào): 3006412
注冊(cè): 2014-03-01
專業(yè): 生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

一般如果你雙酶切之后跑膠只有一條帶就可以認(rèn)為質(zhì)粒被切開了~
有的酶的酶切位點(diǎn)比較相似時(shí)就是容易載體自連，尤其是在使用T4這種連接效率低識(shí)別率低的連接酶的時(shí)候，我們實(shí)驗(yàn)室用Hind III和EcoR I雙酶切的時(shí)候就特別容易發(fā)生載體自連。
可以考慮換酶切位點(diǎn)，或者換連接酶。

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2015-05-23 22:24:11

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

蟲兒飛不飛

木蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 10 (幼兒園)
金幣: 2340.3
散金: 39
帖子: 165
在線: 55.2小時(shí)
蟲號(hào): 2384159
注冊(cè): 2013-03-28
性別: GG
專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)

引用回帖:

3樓: Originally posted by erland21411 at 2015-05-23 22:24:11
一般如果你雙酶切之后跑膠只有一條帶就可以認(rèn)為質(zhì)粒被切開了~
有的酶的酶切位點(diǎn)比較相似時(shí)就是容易載體自連，尤其是在使用T4這種連接效率低識(shí)別率低的連接酶的時(shí)候，我們實(shí)驗(yàn)室用Hind III和EcoR I雙酶切的時(shí)候就特 ...

最近也遇到了使用HindIII和EcorI酶切的位點(diǎn)就特別多的自連，而用NdeI和KpnI切的位點(diǎn)連接就很正常，看到你的說(shuō)法也證實(shí)了我的假設(shè)，正在換酶切位點(diǎn)；

贊一下

回復(fù)此樓

朝聞道，吃酸粥

5樓2020-11-21 15:39:02

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 5 個(gè)回答

普通表情龍兔虎貓

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考博] 26申博自薦 +6	whh869393 2026-03-24	6/300	2026-03-29 21:05 by nxgogo
[考研] 化學(xué)工程085602 305分求調(diào)劑 +22	RichLi_ 2026-03-25	22/1100	2026-03-29 19:51 by 無(wú)際的草原
[考研] 277跪求調(diào)劑 +6	1915668 2026-03-27	10/500	2026-03-29 16:03 by 王亮_大連醫(yī)科大
[考研] 316求調(diào)劑 +7	江辭666 2026-03-26	7/350	2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +4	secret0328 2026-03-28	4/200	2026-03-28 21:09 by 15366876211
[考研] 070300求調(diào)劑306分 +4	26要上岸 2026-03-27	4/200	2026-03-28 13:06 by 唐沐兒
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調(diào)劑 +7	哇呼哼呼哼 2026-03-27	9/450	2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 286求調(diào)劑 +4	丟掉懶惰 2026-03-27	7/350	2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 化學(xué)調(diào)劑 +4	愛(ài)吃番茄的旭 2026-03-24	5/250	2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +10	A-哆啦Z夢(mèng) 2026-03-23	16/800	2026-03-27 15:13 by caszguilin
[考研] 08開頭275求調(diào)劑 +4	拉誰(shuí)不重要 2026-03-26	4/200	2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 考研調(diào)劑 +9	小蠟新筆 2026-03-26	9/450	2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 求調(diào)劑，一志愿南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +4	@taotao 2026-03-26	5/250	2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 一志愿天津大學(xué)339材料與化工求調(diào)劑 +3	江往賣魚 2026-03-26	3/150	2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 打過(guò)很多競(jìng)賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3	askeladz 2026-03-26	3/150	2026-03-26 09:08 by 給你你注意休息
[有機(jī)交流] 有機(jī)合成求助 20+3	FENGSHUJEI 2026-03-23	5/250	2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 材料考研調(diào)劑生 +3	黃粱一夢(mèng)千年 2026-03-24	3/150	2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 292求調(diào)劑 +4	鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-24	4/200	2026-03-24 16:41 by peike
[考研] 085404電子信息284分求調(diào)劑 +4	13659058978 2026-03-24	4/200	2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 336化工調(diào)劑 +4	王大坦1 2026-03-23	5/250	2026-03-23 18:32 by allen-yin