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kid冰貓銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
WB非特異性條帶 已有1人參與
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最近做了幾批western blot實驗，每次顯影都出現(xiàn)很多非特異性條帶，而且亮度都和目的條帶差不多，以前在相同的條件下膜都很干凈的，現(xiàn)在完全不知道問題出在哪，請各位大神指教給點建議。這是我顯影的圖片，非特異性的膜是最近做的，最兩邊的是MARK，以前MARK也不會被顯出來的，另一個是之前做的。 4.jpg `9QZ5Q[J}KS~KFNO[{EN4SD.png |
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【答案】應(yīng)助回帖
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你可以檢測一下一抗的活性，我懷疑是一抗或者二抗的問題，或者封閉的問題。 如果蛋白質(zhì)的抗原免疫簇改變，那么只是結(jié)合的特一性的一抗會改變，一般不會引起啊大量的非特異性的識別。而且因為SDS PAGE處理，WB中的蛋白質(zhì)的抗原免疫簇應(yīng)該主要是序列免疫決定簇，而不是空間免疫決定簇。所以如果真的是目的蛋白質(zhì)本身出了問題，很可能是發(fā)生了降解或者外源性的蛋白質(zhì)污染，SDS PAGE不一定都會把不同的蛋白質(zhì)分離開，檢測是否有外源蛋白質(zhì)污染或者降解，只要測定一下原來成功時的目的蛋白質(zhì)的紅外和紫外光譜，這樣樣品也不會有損失。 蛋白質(zhì)上樣量過大也可能出現(xiàn)非特異性帶。 |
4樓2015-06-15 13:23:04
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