 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4540 | 回復(fù): 9 | ||
惰惰228銀蟲 (小有名氣)
|
[求助]
構(gòu)建載體 待插入片段本身就是pcr凝膠回收產(chǎn)物 酶切后還需要再凝膠回收用于連接嗎 已有4人參與
|
|
打算構(gòu)建一個載體，待插入片段本身就是OE-PCR產(chǎn)物，因有非特異擴(kuò)增 進(jìn)行了凝膠回收； 然后載體和片段分別限制性酶切； 載體進(jìn)行純化（酚氯仿抽提）后用于連接， 片段通常需要進(jìn)行凝膠回收后用于連接， 但我這種情況，還需要再次凝膠回收嗎？還是可以和載體一起進(jìn)行純化？ 請有經(jīng)驗(yàn)的大俠指導(dǎo)！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有229人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 測序正確的片段雙酶切連接表達(dá)載體，提質(zhì)粒PCR驗(yàn)證后，還需要再次測序嗎？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 切膠回收100bp的片段，回收后跑電泳沒有條帶
已經(jīng)有19人回復(fù)
- PBI121載體與目的片段連接后雙酶切問題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 質(zhì)粒，PCR產(chǎn)物雙酶切后膠回收不回來？求大神指導(dǎo)！
已經(jīng)有49人回復(fù)
- PCR片段連接載體，轉(zhuǎn)化不出陽性克隆，求解?
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 緊急求助��！用切膠回收后的質(zhì)粒和片段做連接，轉(zhuǎn)化，最后提取出的質(zhì)粒亂七八糟？？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 片段連接到載體后，總在酶切位點(diǎn)處發(fā)生缺失
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于PCR產(chǎn)物膠回收連T載的問題～
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 目的片段和載體連接一直不上
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 請教關(guān)于載體中酶切位點(diǎn)和插入片段的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 用膠回收產(chǎn)物PCR的問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物及PCR膠回收產(chǎn)物的存放問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 急求酶切，回收及連接詳細(xì)操作步驟
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 載體酶切位點(diǎn)與目的片段重復(fù)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 目的片段和T載體連接后PCR條帶詭異
已經(jīng)有16人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物雙酶切遇到問題，求救�。�！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物純化后酶切，連接
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 雙酶切后切膠回收
已經(jīng)有34人回復(fù)
- 目的基因片段膠回收后酶切，然后再跑膠后發(fā)現(xiàn)條帶很弱，怎么改進(jìn)（求助）
已經(jīng)有8人回復(fù)
- pcr產(chǎn)物膠回收濃度低，能不能和T載體連接
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 請教PCR產(chǎn)物酶切后是否可以直接過柱純化而不膠回收？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 膠回收后再次pcr無目的條帶，急，望神人指點(diǎn)。。。
已經(jīng)有16人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物凝膠回收、酶切等問題請教
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】雙酶切PCR產(chǎn)物的時(shí)間
已經(jīng)有7人回復(fù)
2樓2015-06-17 10:47:14
惰惰228
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1623.1
- 散金: 20
- 帖子: 124
- 在線: 58.3小時(shí)
- 蟲號: 518655
- 注冊: 2008-03-05
- 專業(yè): 植物生理與生化
3樓2015-06-18 00:47:43
4樓2015-06-18 12:19:03
5樓2015-06-18 12:20:08
yangjingjing
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 34 (小學(xué)生)
- 金幣: 2034.2
- 紅花: 2
- 帖子: 402
- 在線: 234.9小時(shí)
- 蟲號: 1030369
- 注冊: 2010-05-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問題
6樓2015-06-19 10:56:57
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
惰惰228(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2015-06-19 20:49:17
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
惰惰228(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2015-06-19 20:49:17
| PCR產(chǎn)物膠回收之后酶切，然后再跑膠回收，最后產(chǎn)物濃度會非常低的，嚴(yán)重影響連接，而且內(nèi)切酶切割DNA也是需要錨定位點(diǎn)的，所以PCR產(chǎn)物直接酶切本身效率就很低，加上如此折騰，最后連接會有麻煩，建議如下做，雖然麻煩，但是會一帆風(fēng)順的：將PCR產(chǎn)物連T載體，選測序正確的菌株抽提質(zhì)粒再雙酶切，酶切片段在電泳時(shí)很明顯，再膠回收做連接。 |
7樓2015-06-19 20:46:20
惰惰228
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1623.1
- 散金: 20
- 帖子: 124
- 在線: 58.3小時(shí)
- 蟲號: 518655
- 注冊: 2008-03-05
- 專業(yè): 植物生理與生化
8樓2015-06-21 09:15:31
惰惰228
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1623.1
- 散金: 20
- 帖子: 124
- 在線: 58.3小時(shí)
- 蟲號: 518655
- 注冊: 2008-03-05
- 專業(yè): 植物生理與生化
9樓2015-06-21 09:18:20
ttgacataat
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 282.7
- 帖子: 33
- 在線: 22.8小時(shí)
- 蟲號: 3370124
- 注冊: 2014-08-17
- 專業(yè): 自身免疫性疾病
10樓2015-06-21 10:34:24
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 惰惰228 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 初始318分求調(diào)劑（有工作經(jīng)驗(yàn)） +3 | 1911236844 2026-03-17 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)，080502，354分求調(diào)劑 +5 | 守候夕陽CF 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +5 | Tyoumou 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +4 | 小材化本科 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 申子申申 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | 梁茜雯 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 295復(fù)試調(diào)劑
+8
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章 +22 | rare12345 2026-03-18 | 22/1100 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +9 | 大可digkids 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 暗涌afhb 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +7 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +4 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 0817調(diào)劑 +3 | 沒有答案_ 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +5 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 0854，計(jì)算機(jī)類招收調(diào)劑
+3
|
胡辣湯放糖 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 東南大學(xué)364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程315分求調(diào)劑 +3 | yang_0104 2026-03-15 | 3/150 |
|