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rabbitzumi銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
問一個關(guān)于熒光實時定量PCR的問題 已有2人參與
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最近在線設(shè)計了一對引物，合成回來做了個預(yù)實驗，大鼠的TNFa, 反應(yīng)體系如下： 2* UltraSYBR Mix : 12.5 uL Forward primer: 0.5 uL(Final concentration: 200 nM) Reverse primer: 0.5 uL(Final concentration: 200 nM) Template DNA: 1 uL RNase free water: 10.5 uL 總反應(yīng)體系為 25 uL. 上下游引物的退火溫度分別為：48.7 和46.6 度。 反應(yīng)條件也基本按照試劑盒說明: 預(yù)變性 95度 10min 變性 95度 15 s 退火/延伸 48度 1 min 變性和退火/延伸 共計循環(huán) 40次 溶解曲線分析：參照儀器默認(rèn)設(shè)定 下面是我的實驗結(jié)果： 我的問題是：擴增曲線怎么會是負(fù)值？ realtime PCR.png |
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