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rabbitzumi銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
問(wèn)一個(gè)關(guān)于熒光實(shí)時(shí)定量PCR的問(wèn)題 已有2人參與
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最近在線設(shè)計(jì)了一對(duì)引物，合成回來(lái)做了個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)，大鼠的TNFa, 反應(yīng)體系如下： 2* UltraSYBR Mix : 12.5 uL Forward primer: 0.5 uL(Final concentration: 200 nM) Reverse primer: 0.5 uL(Final concentration: 200 nM) Template DNA: 1 uL RNase free water: 10.5 uL 總反應(yīng)體系為 25 uL. 上下游引物的退火溫度分別為：48.7 和46.6 度。 反應(yīng)條件也基本按照試劑盒說(shuō)明: 預(yù)變性 95度 10min 變性 95度 15 s 退火/延伸 48度 1 min 變性和退火/延伸 共計(jì)循環(huán) 40次 溶解曲線分析：參照儀器默認(rèn)設(shè)定 下面是我的實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 我的問(wèn)題是：擴(kuò)增曲線怎么會(huì)是負(fù)值？ realtime PCR.png |
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rabbitzumi
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4樓2015-06-24 19:40:14
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5樓2015-06-24 19:40:56
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