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酵母誘導(dǎo)表達相關(guān)問題？
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本人新手，在做畢赤酵母誘導(dǎo)表達。現(xiàn)在有:三個個問題： 1：對照的設(shè)置。我沒有做空質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)，所以對照設(shè)置的是空菌的誘導(dǎo)，未誘導(dǎo)，目的菌的誘導(dǎo)，未誘導(dǎo)。四個同時做，不知道這樣做是否有對照性？ 2：在BMGY培養(yǎng)基里搖到OD600=3，換到BMMY誘導(dǎo)培養(yǎng)的問題。對于BMMY培養(yǎng)基，按照正常的配置，除了甲醇其余的都加好，用它來調(diào)OD600=1后，再加甲醇，是按照整個配置體積來算1%還是調(diào)完OD值后按實際體積加1%。 例如，200ml的BMMY培養(yǎng)基，除了甲醇外的體積是180.4ml，調(diào)完OD值后大約也是180ml。我想用100%甲醇往里加，應(yīng)該加2ml？還是1.8ml？ 3：這次實驗中我用的2ml甲醇，對于上邊的四個樣品，未誘導(dǎo)的樣我還是按長長配方加了20ml 10x甘油 ，誘導(dǎo)的樣品加2ml甲醇。一天后發(fā)現(xiàn)未誘導(dǎo)的長的很濃，而誘導(dǎo)的長的一般，這是什么原因呢？ |
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2樓2015-07-15 08:05:38
3樓2015-07-15 10:23:32
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