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求大神指點，我的基因工程菌是不是退化了？
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師姐畢業(yè)了，老師讓我測定她留下來的，一株導(dǎo)入脂肪酶的釀酒酵母的酶活。參考學(xué)姐的方法，我從-20℃冰箱里取出甘油保藏的菌種，在YPD固體培養(yǎng)基中涂布接種，沒有加選擇壓力氨芐青霉素，培養(yǎng)了三天，37℃，觀察到固體培養(yǎng)基均勻地長了兩種不同的菌落， ，我以為是雜菌，就用YPD選擇培養(yǎng)基，加入選擇壓力--氨芐青霉素，分離出了目的菌種。然后在固體培養(yǎng)基中連續(xù)傳代三次，再接種至種子培養(yǎng)基中液體培養(yǎng)（搖床溫度30℃，轉(zhuǎn)速200rmp/min），傳代三次，每12小時傳一代。之所以在液體培養(yǎng)基中傳代三次是因為學(xué)姐說要多傳代幾次，這樣就可以使得菌種的活力高一些，哎，可我不知道這樣對不對。然后，我就將得到的種子培養(yǎng)液接種到了誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，所測酶活沒有師姐之前測的高，她是70u/mg.min,我是20u/mg.min。我想驗證一下誘導(dǎo)培養(yǎng)基沒有染菌，于是又用了不加氨芐青霉素的YPD選擇培養(yǎng)基（培養(yǎng)條件與之前相同）涂布了誘導(dǎo)培養(yǎng)基里培養(yǎng)出來的菌種，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，菌落形態(tài)和之前的發(fā)生了比較大的變化，看上去是兩種不同的菌。我覺得酶活降低和菌的這些變化有關(guān)。 請教各位大神，這到底是怎么回事，是菌種退化了呢，還是我的操作步驟有什么不妥。我剛剛學(xué)基因工程，實驗室沒有人做，只能自己摸索。懇求大神給一些建議！ |
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木蟲 (著名寫手)
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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 。酵母為啥要用37度培養(yǎng)了。負(fù)20度保存的菌種穩(wěn)定期至多3個月�？茨銕熃阌袥]有保存質(zhì)粒，重新轉(zhuǎn)化下，若沒有，就提下質(zhì)粒，重新轉(zhuǎn)化下。另外克隆最好保存到負(fù)70度可能比較穩(wěn)定，或者負(fù)44度，負(fù)20度只能臨時保存，另外保存克隆菌時盡量提出質(zhì)粒，質(zhì)粒和菌同時保存�？寺【鷷儺�，但質(zhì)粒不會，即使菌出問題，然后重新轉(zhuǎn)化下就好了。另外測酶活不一樣也很正常，即使是同一個菌，同樣的培養(yǎng)方式，用藥瓶培養(yǎng)培養(yǎng)出菌的狀態(tài)也有差別的，比如接種量，種子的活力，等等都會有影響。祝實驗順利。 |
6樓2015-08-26 15:11:32
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