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求大神指點(diǎn)，我的基因工程菌是不是退化了？
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師姐畢業(yè)了，老師讓我測(cè)定她留下來的，一株導(dǎo)入脂肪酶的釀酒酵母的酶活。參考學(xué)姐的方法，我從-20℃冰箱里取出甘油保藏的菌種，在YPD固體培養(yǎng)基中涂布接種，沒有加選擇壓力氨芐青霉素，培養(yǎng)了三天，37℃，觀察到固體培養(yǎng)基均勻地長(zhǎng)了兩種不同的菌落， ，我以為是雜菌，就用YPD選擇培養(yǎng)基，加入選擇壓力--氨芐青霉素，分離出了目的菌種。然后在固體培養(yǎng)基中連續(xù)傳代三次，再接種至種子培養(yǎng)基中液體培養(yǎng)（搖床溫度30℃，轉(zhuǎn)速200rmp/min），傳代三次，每12小時(shí)傳一代。之所以在液體培養(yǎng)基中傳代三次是因?yàn)閷W(xué)姐說要多傳代幾次，這樣就可以使得菌種的活力高一些，哎，可我不知道這樣對(duì)不對(duì)。然后，我就將得到的種子培養(yǎng)液接種到了誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，所測(cè)酶活沒有師姐之前測(cè)的高，她是70u/mg.min,我是20u/mg.min。我想驗(yàn)證一下誘導(dǎo)培養(yǎng)基沒有染菌，于是又用了不加氨芐青霉素的YPD選擇培養(yǎng)基（培養(yǎng)條件與之前相同）涂布了誘導(dǎo)培養(yǎng)基里培養(yǎng)出來的菌種，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，菌落形態(tài)和之前的發(fā)生了比較大的變化，看上去是兩種不同的菌。我覺得酶活降低和菌的這些變化有關(guān)。 請(qǐng)教各位大神，這到底是怎么回事，是菌種退化了呢，還是我的操作步驟有什么不妥。我剛剛學(xué)基因工程，實(shí)驗(yàn)室沒有人做，只能自己摸索。懇求大神給一些建議！ |
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