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求大神指點,我的基因工程菌是不是退化了?
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師姐畢業(yè)了,老師讓我測定她留下來的,一株導(dǎo)入脂肪酶的釀酒酵母的酶活。參考學(xué)姐的方法,我從-20℃冰箱里取出甘油保藏的菌種,在YPD固體培養(yǎng)基中涂布接種,沒有加選擇壓力氨芐青霉素,培養(yǎng)了三天,37℃,觀察到固體培養(yǎng)基均勻地長了兩種不同的菌落, ,我以為是雜菌,就用YPD選擇培養(yǎng)基,加入選擇壓力--氨芐青霉素,分離出了目的菌種。然后在固體培養(yǎng)基中連續(xù)傳代三次,再接種至種子培養(yǎng)基中液體培養(yǎng)(搖床溫度30℃,轉(zhuǎn)速200rmp/min),傳代三次,每12小時傳一代。之所以在液體培養(yǎng)基中傳代三次是因為學(xué)姐說要多傳代幾次,這樣就可以使得菌種的活力高一些,哎,可我不知道這樣對不對。然后,我就將得到的種子培養(yǎng)液接種到了誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,所測酶活沒有師姐之前測的高,她是70u/mg.min,我是20u/mg.min。我想驗證一下誘導(dǎo)培養(yǎng)基沒有染菌,于是又用了不加氨芐青霉素的YPD選擇培養(yǎng)基(培養(yǎng)條件與之前相同)涂布了誘導(dǎo)培養(yǎng)基里培養(yǎng)出來的菌種,結(jié)果發(fā)現(xiàn),菌落形態(tài)和之前的發(fā)生了比較大的變化,看上去是兩種不同的菌。我覺得酶活降低和菌的這些變化有關(guān)。 請教各位大神,這到底是怎么回事,是菌種退化了呢,還是我的操作步驟有什么不妥。我剛剛學(xué)基因工程,實驗室沒有人做,只能自己摸索。懇求大神給一些建議! |
木蟲 (著名寫手)
有機的微生物大神
鐵桿木蟲 (著名寫手)

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