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sdjnyxn123銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
請(qǐng)問(wèn)為什么測(cè)序?qū)α说闹亟M質(zhì)粒，雙酶能切出其他條帶 已有4人參與
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做表達(dá)做了快一年了一直沒(méi)有表達(dá)出來(lái)，心里快急死了··· 是一個(gè)pet30與目的基因的重組質(zhì)粒，目的基因117bp，總共只有11kDa大小的氨基酸，嘗試了多次誘導(dǎo)表達(dá)都不成功 測(cè)序沒(méi)有問(wèn)題（只測(cè)了T7啟動(dòng)子后的序列，加上插入的目的基因序列，跟給出的pet30序列圖是完全相同的，翻譯成氨基酸理論上也可以正常表達(dá)） 目前在找問(wèn)題，發(fā)現(xiàn)酶切這個(gè)地方一直有問(wèn)題沒(méi)有解決 這個(gè)是提取的質(zhì)粒的照片 之后將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入其他BL21和DH5a，測(cè)序也都正確； 這個(gè)是將此質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切的電泳照片 請(qǐng)問(wèn)為什么在1000多和3000多的地方也有條帶呢？ 按理說(shuō)商業(yè)質(zhì)粒不應(yīng)該會(huì)有其他部位能切開(kāi)的吧？請(qǐng)問(wèn)這是什么原因呢？ |
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siriusxuan
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3樓2015-12-26 20:47:55
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