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sdjnyxn123銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
請問為什么測序?qū)α说闹亟M質(zhì)粒，雙酶能切出其他條帶 已有4人參與
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做表達(dá)做了快一年了一直沒有表達(dá)出來，心里快急死了··· 是一個pet30與目的基因的重組質(zhì)粒，目的基因117bp，總共只有11kDa大小的氨基酸，嘗試了多次誘導(dǎo)表達(dá)都不成功 測序沒有問題（只測了T7啟動子后的序列，加上插入的目的基因序列，跟給出的pet30序列圖是完全相同的，翻譯成氨基酸理論上也可以正常表達(dá)） 目前在找問題，發(fā)現(xiàn)酶切這個地方一直有問題沒有解決 這個是提取的質(zhì)粒的照片 之后將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入其他BL21和DH5a，測序也都正確； 這個是將此質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切的電泳照片 請問為什么在1000多和3000多的地方也有條帶呢？ 按理說商業(yè)質(zhì)粒不應(yīng)該會有其他部位能切開的吧？請問這是什么原因呢？ |
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2樓2015-12-26 20:32:25
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【答案】應(yīng)助回帖
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質(zhì)粒雙酶切的目的片段太小，因此質(zhì)量就低，在電泳后帶淺或看不清（或看不到）是很正常的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2015-12-27 13:31:34
sdjnyxn123
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8樓2015-12-27 23:09:16
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我前面也出現(xiàn)過這種情況，有可能像前面幾位蟲友說的一樣，你的質(zhì)粒在提取過程中存在問題，而你在雙酶切時(shí)，酶的活性不好，所以出現(xiàn)這樣的問題，你可以重提一次質(zhì)粒，重新買兩管酶試試，現(xiàn)在已經(jīng)有快速酶切的酶了，可以試試 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2015-12-28 08:42:38
zht930528
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10樓2015-12-28 11:14:53
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