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jcstone1027鐵桿木蟲 (正式寫手)
木蟲
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[交流]
兩位點(diǎn)的定點(diǎn)突變 已有3人參與
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想突變基因片段上兩個(gè)相隔比較遠(yuǎn)的位點(diǎn)，用DPN1法，因?yàn)樽鲆粋�(gè)位點(diǎn)擴(kuò)增出的是帶缺刻的質(zhì)粒，對(duì)于另外一個(gè)位點(diǎn)無(wú)法以此缺刻質(zhì)粒為模板突變第二處位點(diǎn)，想過(guò)用磷酸化的引物，讓第一遍形成的缺刻質(zhì)粒閉合成環(huán)，再以此環(huán)狀質(zhì)粒為模板突變第二處位點(diǎn)，大家覺(jué)得第一步擴(kuò)出的缺刻質(zhì)粒閉合成環(huán)可以實(shí)現(xiàn)嗎，有誰(shuí)這樣做過(guò)？十分想知道答案，謝謝大家！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2016-11-25 00:29:33
jcstone1027
鐵桿木蟲 (正式寫手)
木蟲
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我的意思是第一次擴(kuò)完重組質(zhì)粒后，它形成的是帶缺刻的質(zhì)粒，我不想立即做轉(zhuǎn)化測(cè)序，而是想拿擴(kuò)增完的缺刻質(zhì)粒再擴(kuò)，把第二處位點(diǎn)也變回來(lái)，因?yàn)榈谝槐樾纬傻氖侨笨藤|(zhì)粒，再用這個(gè)模板突變另外一處位點(diǎn)，原理上不能實(shí)現(xiàn)，也就是說(shuō)用帶磷酸化的引物擴(kuò)重組質(zhì)粒，擴(kuò)增產(chǎn)物能形成完整的環(huán)狀質(zhì)粒嗎？我是這個(gè)意思，謝謝你的回答 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2016-11-25 12:10:55
jiananx
銅蟲 (小有名氣)
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請(qǐng)教一下缺刻質(zhì)粒是什么意思呢？我曾經(jīng)是先突變一個(gè)位點(diǎn)，跑膠如果條帶清晰，直接消化后，轉(zhuǎn)化再提取，測(cè)序篩選突變成功的再進(jìn)行第二次突變。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2016-11-25 22:51:35
mailmrcai
銅蟲 (正式寫手)
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這個(gè)不太可行吧，沒(méi)試過(guò)，一般都是第一步克隆好，再克隆第二步，也不麻煩多少。其實(shí)我覺(jué)得如果這樣也可以，那還不如直接加四條引物pcr，總會(huì)有陽(yáng)性克隆，可能比例會(huì)低點(diǎn) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-11-25 22:55:56
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