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zxd95至尊木蟲(chóng) (著名寫手)
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[交流]
【求助/交流】蛋白質(zhì)純化的疑難問(wèn)題 已有10人參與
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年前就做蛋白純化，該蛋白使用pET-32a表達(dá)，分子量約34kDa，表達(dá)菌為Rosetta(DE3),因?yàn)樗拗骶旧碓?5kDa左右就有表達(dá)； 使用HisTrap 1ml鎳柱純化后發(fā)現(xiàn)，目標(biāo)蛋白和宿主菌35kDa左右蛋白均掛柱，我是使用說(shuō)明書推薦的Buffer(20mM磷酸緩沖液 + 0.5M NaCl + 30、60、100、150、200、250、300、500mM咪唑，pH7.4)梯度洗脫的，發(fā)現(xiàn)在100和150mM咪唑下，目標(biāo)蛋白和35kDa雜蛋白均洗脫。 割膠回收也做不出來(lái)，郁悶中�。。。。。。。。�！  請(qǐng)蟲(chóng)友們指導(dǎo)！ 謝謝！ [ Last edited by zxd95 on 2011-3-28 at 12:15 ] |
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