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794378428銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
合成基因沒有檢測到酶活？？？
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| 公司合成了一個質粒，在大腸桿菌BL21中表達，經IPTG誘導后，離心得到菌體，破碎細胞，純化，經過SDS-PAGE能看到目的蛋白的條帶，但是沒有檢測到酶活。不知道大家有沒有遇到過這種情況，是哪個環(huán)節(jié)上可能出現了問題呢，困惑很久了，請大家提提建議 |
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以前看同學做蛋白表達，經常出現這種問題。 你確信構建的質粒上插入的基因片段與原始基因序列相比，沒有出現堿基突變或缺失、插入的情況嗎？ 如果在基因層面上沒有錯誤的話，應該就是測酶活環(huán)節(jié)出現了問題。有些蛋白表達需要加入一些特殊的金屬離子，這個你要仔細查一下。之前我有個同學測了半年的酶活都沒有結果，最后往里面加了種離子就可以了。 看一下這個酶的底物，有沒有什么特殊性。 |
8樓2011-07-04 17:01:22
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