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794378428銀蟲(chóng) (小有名氣)
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合成基因沒(méi)有檢測(cè)到酶活？？？
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| 公司合成了一個(gè)質(zhì)粒，在大腸桿菌BL21中表達(dá)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，離心得到菌體，破碎細(xì)胞，純化，經(jīng)過(guò)SDS-PAGE能看到目的蛋白的條帶，但是沒(méi)有檢測(cè)到酶活。不知道大家有沒(méi)有遇到過(guò)這種情況，是哪個(gè)環(huán)節(jié)上可能出現(xiàn)了問(wèn)題呢，困惑很久了，請(qǐng)大家提提建議 |
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7樓2011-07-04 14:40:02
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以前看同學(xué)做蛋白表達(dá)，經(jīng)常出現(xiàn)這種問(wèn)題。 你確信構(gòu)建的質(zhì)粒上插入的基因片段與原始基因序列相比，沒(méi)有出現(xiàn)堿基突變或缺失、插入的情況嗎？ 如果在基因?qū)用嫔蠜](méi)有錯(cuò)誤的話，應(yīng)該就是測(cè)酶活環(huán)節(jié)出現(xiàn)了問(wèn)題。有些蛋白表達(dá)需要加入一些特殊的金屬離子，這個(gè)你要仔細(xì)查一下。之前我有個(gè)同學(xué)測(cè)了半年的酶活都沒(méi)有結(jié)果，最后往里面加了種離子就可以了。 看一下這個(gè)酶的底物，有沒(méi)有什么特殊性。 |
8樓2011-07-04 17:01:22
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9樓2011-07-05 08:23:59
10樓2011-07-05 10:31:12
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