 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4055 | 回復(fù): 18 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
兔兔yy070330銅蟲 (初入文壇)
|
[求助]
畢赤酵母表達(dá)出蛋白但沒有活性
|
|
|
各位大蝦，小妹最近用畢赤酵母KM71和GS115表達(dá)一個水解酶，該酶在原始菌中是分泌表達(dá)的。我利用的是pPIC9K質(zhì)粒，構(gòu)建的質(zhì)粒電轉(zhuǎn)進(jìn)兩個宿主，取空的pPIC9K質(zhì)粒電轉(zhuǎn)酵母細(xì)胞作為陰性對照。另外在涂板的時候我把制備的感受態(tài)細(xì)胞也涂了MD板，沒有長出來，感受態(tài)應(yīng)該是沒有問題。我是直接用1mg/ml的G418 MD板進(jìn)行篩選陽性菌落，，過了48小時左右長出菌落，是白色的，形態(tài)也很像酵母。將這些菌落接入含有1mg/ml的G418 MD液體培養(yǎng)基，提取基因組用通用引物AOX3'、AOX5'和自己的特異性引物進(jìn)行PCR都擴出了條帶，大小也和目的基因大小相當(dāng)。之后接種到BMGY培養(yǎng)基，過夜培養(yǎng)后轉(zhuǎn)接到BMMY培養(yǎng)基，每天補加甲醇至終濃度為1%，之后每天取樣測酶活，第6天的時候取上清液進(jìn)行SDS-PAGE檢測，有表達(dá)條帶，大小也和預(yù)測的目的蛋白大小相當(dāng)。但就是沒有活性。做了80%硫酸銨沉淀，仍然沒有活性。 最近老板催的緊，壓力很大。請各位幫我分析分析，我的操作有沒有什么問題，大恩不言謝  |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
298求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
336求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
296求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
【考研調(diào)劑】化學(xué)專業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠心求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
初試 317
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
0703化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 蛋白成功表達(dá)，卻沒有活性，換個表達(dá)系統(tǒng)有必要嗎？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 畢赤酵母表達(dá)重組蛋白遇到大難題
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 重組大腸桿菌表達(dá)蛋白可溶，但無活性
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 重組蛋白活性消失。。。
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 畢赤酵母表達(dá)后的蛋白濃縮
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 畢赤酵母表達(dá)時的雜蛋白問題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 外源蛋白在畢赤酵母中不表達(dá)
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 重組酵母表達(dá)了，但是蛋白沒有了活力是什么原因
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 畢赤酵母表達(dá)蛋白純化
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 畢赤酵母表達(dá)培養(yǎng)基
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 請教：我的蛋白表達(dá)出來了，可溶，但為什么大部分都是沒有活性的?
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 問個關(guān)于畢赤酵母接種的問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 表達(dá)蛋白折疊不正確會有活性麼？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 畢赤酵母表達(dá)一直不表達(dá)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 畢赤表達(dá)一酶基因，跑蛋白電泳只有一條帶，是不是不用純化了呀
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 原核表達(dá)，蛋白活性問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 關(guān)于畢赤酵母表達(dá)
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 有關(guān)畢赤酵母的平板篩選
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 畢赤酵母表達(dá)的蛋白無活性
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 大家見到過畢赤酵母表達(dá)出的外源蛋白分子量比實際分子量小嗎，而且還有活性？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 酵母表達(dá)，為什么表達(dá)不出來？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】畢赤酵母表達(dá)胞外蛋白，sds電泳后看不到條帶
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】有人用過畢赤酵母GS115嗎？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】請問畢赤酵母胞外胞外表達(dá)有酶活不蛋白，正常嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】畢赤酵母表達(dá)蛋白的奇怪現(xiàn)象
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】畢赤酵母表達(dá)無活性
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】推薦釀酒酵母、畢赤酵母胞內(nèi)表達(dá)質(zhì)粒
已經(jīng)有10人回復(fù)
兔兔yy070330
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 24.6
- 紅花: 1
- 帖子: 35
- 在線: 7.9小時
- 蟲號: 1391397
- 注冊: 2011-09-05
- 專業(yè): 生物化學(xué)
9樓2011-09-11 22:10:42
2樓2011-09-07 09:27:18
兔兔yy070330
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 24.6
- 紅花: 1
- 帖子: 35
- 在線: 7.9小時
- 蟲號: 1391397
- 注冊: 2011-09-05
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2011-09-07 16:40:00
dhmdddd
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 貴賓: 0.01
- 金幣: 3930.1
- 散金: 939
- 紅花: 3
- 帖子: 815
- 在線: 561.1小時
- 蟲號: 839789
- 注冊: 2009-09-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
4樓2011-09-07 17:00:07
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-20 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +15 | 大米飯！ 2026-03-15 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩301分求調(diào)劑 +4 | Liyouyumairs 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +4 | chuanzhu川燭 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +10 | 冷笙123 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研]
 271材料工程求調(diào)劑
+8
|
.6lL 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +4 | 小材化本科 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學(xué)調(diào)劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中農(nóng)業(yè)071010，總分320求調(diào)劑 +3 | 困困困困坤坤 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 招收博士1-2人 +3 | QGZDSYS 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +7 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿福大288有機化學(xué)，求調(diào)劑 +3 | 小木蟲200408204 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +6 | zbzihdhd 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八6八68 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 素年祭語 2026-03-15 | 5/250 |
|