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qurande金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于畢赤酵母gs115可否用轉(zhuǎn)化化學(xué)轉(zhuǎn)化 已有1人參與
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問(wèn)題1，GS115能不能用化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，用氯化鋰處理細(xì)胞制成感受態(tài)，然后用鮭精NDA 試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)化 2，我用的載體是pPIC9k，能否以非線性的狀態(tài)進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)化？若轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒必須是線性的，那么化學(xué)轉(zhuǎn)化方法可以轉(zhuǎn)化線性的DNA么？ |
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susizheng
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4樓2012-01-14 09:53:41
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5樓2012-01-14 10:20:55
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您好，我還有幾個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教您一下，麻煩您了，謝謝 我用的是畢赤酵母GS115和KM71，載體是PIC3.5K，線性化酶是SacI 1. 電轉(zhuǎn)后直接涂加YNB、生物素和葡萄糖的MD板就可以了嗎？長(zhǎng)出來(lái)的是不是就是陽(yáng)性克隆子？ 2. 轉(zhuǎn)化后我看手冊(cè)上說(shuō)GS115是mut+型，而KM71是muts型？那還用不用進(jìn)一步進(jìn)行分型鑒定了？用必要？ 3. 有必要進(jìn)行多拷貝數(shù)的篩選嗎？ 4.我準(zhǔn)備進(jìn)行不同梯度的篩選，G418的濃度分別是0.5,1,2,4.有必要這樣分嗎？還是直接選一個(gè)濃度梯度就行了？ 5. 保存菌種的時(shí)候，收集菌以后直接由PYD重懸至OD-50-100，然后加80%的甘油至終濃度為15%可以嗎？ 6. 做多拷貝數(shù)克隆子篩選的時(shí)候，G418是制平板的時(shí)候加進(jìn)去的還是做好平板，在用之前涂上去的？，要涂得話應(yīng)該怎么操作?謝謝 7. 做PCR鑒定的時(shí)候能不能用菌落PCR？引物用我的特異性引物可以嗎？ 期待您的回復(fù)！ 我剛開始做，一些基本的問(wèn)題都搞不明白，希望您多多指教！多給我講點(diǎn)東西，謝謝 |
6樓2012-09-10 17:50:03
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7樓2015-04-01 09:46:39
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