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挑取單菌落的問(wèn)題 已有4人參與
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挑取單菌落到試管中搖菌，我們實(shí)驗(yàn)室用的是挑取單菌落到5ml左右YEB液體培養(yǎng)基的試管中。配YEB的時(shí)候一般都是配制在50ml錐形瓶中，之后挑取單菌落的話只用5ml左右（師兄說(shuō)也還可以多加點(diǎn)，都可以），那各位加抗生素是加到50ml的液體培養(yǎng)基中混勻后再轉(zhuǎn)到試管中5ml左右的YEB液體培養(yǎng)基，還是直接量取5ml的YEB培養(yǎng)基到試管中再加入抗生素？要是先加抗生素再轉(zhuǎn)移之后會(huì)剩下很多YEB液體培養(yǎng)基，如果里面加了抗生素的話也相當(dāng)于浪費(fèi)了很多抗生素。我又問(wèn)了師兄說(shuō)加了抗生素的液體培養(yǎng)基可以保存嗎，他說(shuō)一周左右就失效了，只能沒(méi)用完的就倒了，我感覺(jué)好浪費(fèi)哦！我們實(shí)驗(yàn)室都是這么做的，請(qǐng)問(wèn)各位蟲(chóng)友們都是怎么做的？ [ Last edited by yangsirun on 2012-4-11 at 18:25 ] |
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如果先分裝培養(yǎng)基再加抗生素的話，由于加入的抗生素量少，會(huì)造成誤差，但一般有點(diǎn)誤差對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響不會(huì)很大，我一般都是分裝為5ml以后再加抗生素。 如果近期用的抗性培養(yǎng)基比較多的話，也可以事先加到整體的培養(yǎng)基中。 抗生素失效的問(wèn)題：這還得看抗生素的種類。比如kan就沒(méi)有關(guān)系，甚至高壓滅菌也不會(huì)失效。最常見(jiàn)失效的是氨芐青霉素，一般都現(xiàn)用現(xiàn)價(jià)。而且在做轉(zhuǎn)化時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)氨芐平板上會(huì)形成衛(wèi)星菌落，所以我們現(xiàn)在一般都盡量避免使用amp。 |
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流，歡迎常來(lái)哦 2012-04-13 14:16:46
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氨芐青霉素工作濃度是100mg/ml，硫酸卡那霉素工作濃度是50mg/ml，都是配成一般濃度使用。向小體積培養(yǎng)液里添加時(shí)，可以稀釋十倍。主要是為了移液體積準(zhǔn)確，體積太少了都在吸頭里打不出來(lái)，必須把吸頭插進(jìn)培養(yǎng)液才打干凈，這時(shí)易造成污染，如果往試管里加都接觸不到液面。 具體情況具體分析嘛，稀釋時(shí)不都是用無(wú)菌水哈，有的要用特定溶液。  |
9樓2012-04-13 09:43:25
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