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zhjzhou木蟲 (著名寫手)
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[求助]
大家一般用PET28a做蛋白表達的時候用哪幾個酶酶切
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第一次用PET28a這個載體，想請教用過的各位，目的基因連接到這個載體一般用的是哪兩個酶做的酶切��？我看論壇里有的說是NCO I 開始翻譯，用這個的比較多，我這邊的師兄用過的說要用BamH I 和X ho I之間的這些酶做 酶切，本人正在煩惱用什么酶做酶切才不影響目的蛋白的表達呢，知道的請告之，謝謝！ |
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lxj341401
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我們Nco I 用得最多，原因是用這個酶切位點引入的無關(guān)序列最少（N端最多多兩個氨基酸），如果要保留N端的his-tag就用NdeI位點；后面的酶切位點用XhoI較多。 其實用哪個酶切位點最主要的還是要看你的目的基因內(nèi)部沒有哪些酶切位點，要不要保留載體上面的his-tag等，還有一個就是盡量不要選擇靠得很近的兩個酶切位點，怕酶切是由于空間位阻效應(yīng)切不開。 |
2樓2012-05-02 13:24:13
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3樓2012-05-02 14:42:42
liangxiuyan
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6樓2014-08-22 11:21:05
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