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zhjzhou木蟲 (著名寫手)
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[求助]
大家一般用PET28a做蛋白表達的時候用哪幾個酶酶切
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第一次用PET28a這個載體，想請教用過的各位，目的基因連接到這個載體一般用的是哪兩個酶做的酶切啊？我看論壇里有的說是NCO I 開始翻譯，用這個的比較多，我這邊的師兄用過的說要用BamH I 和X ho I之間的這些酶做 酶切，本人正在煩惱用什么酶做酶切才不影響目的蛋白的表達呢，知道的請告之，謝謝！ |
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3樓2012-05-02 14:42:42
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
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【答案】應助回帖
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我們Nco I 用得最多，原因是用這個酶切位點引入的無關序列最少（N端最多多兩個氨基酸），如果要保留N端的his-tag就用NdeI位點；后面的酶切位點用XhoI較多。 其實用哪個酶切位點最主要的還是要看你的目的基因內部沒有哪些酶切位點，要不要保留載體上面的his-tag等，還有一個就是盡量不要選擇靠得很近的兩個酶切位點，怕酶切是由于空間位阻效應切不開。 |
2樓2012-05-02 13:24:13
liangxiuyan
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4樓2012-05-02 14:50:52
5樓2012-05-17 19:41:12
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