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zhjzhou木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
大家一般用PET28a做蛋白表達(dá)的時(shí)候用哪幾個(gè)酶酶切
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第一次用PET28a這個(gè)載體，想請(qǐng)教用過(guò)的各位，目的基因連接到這個(gè)載體一般用的是哪兩個(gè)酶做的酶切��？我看論壇里有的說(shuō)是NCO I 開(kāi)始翻譯，用這個(gè)的比較多，我這邊的師兄用過(guò)的說(shuō)要用BamH I 和X ho I之間的這些酶做 酶切，本人正在煩惱用什么酶做酶切才不影響目的蛋白的表達(dá)呢，知道的請(qǐng)告之，謝謝！ |
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kycg2011
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5樓2012-05-17 19:41:12
lxj341401
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【答案】應(yīng)助回帖
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我們Nco I 用得最多，原因是用這個(gè)酶切位點(diǎn)引入的無(wú)關(guān)序列最少（N端最多多兩個(gè)氨基酸），如果要保留N端的his-tag就用NdeI位點(diǎn)；后面的酶切位點(diǎn)用XhoI較多。 其實(shí)用哪個(gè)酶切位點(diǎn)最主要的還是要看你的目的基因內(nèi)部沒(méi)有哪些酶切位點(diǎn)，要不要保留載體上面的his-tag等，還有一個(gè)就是盡量不要選擇靠得很近的兩個(gè)酶切位點(diǎn)，怕酶切是由于空間位阻效應(yīng)切不開(kāi)。 |
2樓2012-05-02 13:24:13
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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西瓜: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-05-02 18:47:02
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3樓2012-05-02 14:42:42
liangxiuyan
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4樓2012-05-02 14:50:52
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