 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2651 | 回復(fù): 16 | ||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MicEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||
celia2012銅蟲 (小有名氣)
|
[求助]
揪心的菌落PCR 已有2人參與
|
|
|
幾天挑選了單菌落，進(jìn)行種屬鑒定，做了17個(gè)菌落PCR，成功了11個(gè)，實(shí)驗(yàn)過程是：挑菌加入50微升無菌水，99度裂解5分鐘，后冰浴五分鐘，離心10分鐘取上清液進(jìn)行PCR,退火溫度是55度，循環(huán)數(shù)35，25微升體系（加5微升模板） 后來繼續(xù)挑選進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，問題不斷，P出來的成功率低，不到一半，而且好多出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象，這在第一次實(shí)驗(yàn)中沒出現(xiàn)過，后進(jìn)行測序說是有雜合、結(jié)合現(xiàn)象，測序終止，立馬心情受到影響了，做了大量的菌落PCR， 幾天全浪費(fèi)了~不知道是什么原因 1.由于我做的菌差異大，要一一摸條件好煩，有的濃度低了，有個(gè)又高了，難以控制，挑菌不知道挑多少合適 2.不知道做菌落PCR,是不是要將菌活化一下再挑，菌放在冰箱大概有20天了，菌放的時(shí)間長了是不是影響實(shí)驗(yàn) 3.退火溫度如何確定，多少適合？是否循環(huán)數(shù)過高了 4.菌落PCR是否可靠？還是直接先提DNA適合？主要是我要做200個(gè)菌，提起來麻煩，現(xiàn)在看來菌落PCR也不簡單？ 希望有經(jīng)驗(yàn)的蟲友們給點(diǎn)意見吧~萬分感謝啊~糾結(jié)萬惡的實(shí)驗(yàn)啊~  |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
291求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料與化工272求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
283求調(diào)劑（080500）
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料科學(xué)與工程求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué)材料與化工（085600）296求調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
考研調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
343求調(diào)劑085601
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
08工科求調(diào)劑286
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
337求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
329求調(diào)劑，一志愿西北工業(yè)大學(xué)，材料工程（085601）
已經(jīng)有10人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 菌落PCR篩選
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 菌落PCR無條帶
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 關(guān)于轉(zhuǎn)化、菌落PCR
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 請(qǐng)教各位前輩 為什么我做菌落PCR總也P不出來
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 連接轉(zhuǎn)化后菌落PCR驗(yàn)證出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR的條件
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR擴(kuò)出來的片段不是目的片段，咋辦��？？？？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR求助
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR問題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 【求助/交流】酵母菌落PCR
已經(jīng)有12人回復(fù)
阿博小碩士
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 46.8
- 散金: 2
- 帖子: 78
- 在線: 15.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1239315
- 注冊(cè): 2011-03-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
8樓2012-08-10 14:09:06
2樓2012-08-09 17:50:37
celia2012
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 236.4
- 散金: 42
- 帖子: 116
- 在線: 54.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1654655
- 注冊(cè): 2012-03-01
- 專業(yè): 景觀與區(qū)域生態(tài)學(xué)
3樓2012-08-09 19:09:49
4樓2012-08-09 19:25:59
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhang8826857: 金幣+2, 鼓勵(lì) 2012-08-10 10:15:59
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhang8826857: 金幣+2, 鼓勵(lì) 2012-08-10 10:15:59
| 親，你的菌大體是什么菌�。烤N鑒定就是擴(kuò)16s唄，我做過，主要是放線菌和一些別的細(xì)菌。我的心得是：首先，要擴(kuò)增的菌必須是活化后剛長出來的很嫩的菌（這點(diǎn)比較重要），只需要挑取少量，加20微升無菌水，水浴煮沸10min即可做模板了。我用的是50微升體系，擴(kuò)增條件就是隨便看了一篇外文文獻(xiàn)上的擴(kuò)增條件。關(guān)于你說的拖尾現(xiàn)象，只要有目的條帶即可，因?yàn)楝F(xiàn)在的測序公司都是可以免費(fèi)膠回收測序的。 |
5樓2012-08-10 09:43:29
6樓2012-08-10 09:53:33
zqp9110
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 2144.5
- 散金: 9
- 紅花: 4
- 帖子: 528
- 在線: 118.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 997891
- 注冊(cè): 2010-04-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
7樓2012-08-10 10:59:48
阿博小碩士
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 46.8
- 散金: 2
- 帖子: 78
- 在線: 15.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1239315
- 注冊(cè): 2011-03-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
9樓2012-08-10 14:14:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
10樓2012-08-10 15:08:10
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 celia2012 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +5 | 彼岸t 2026-03-29 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +8 | Koxui 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，321分求調(diào)劑 +5 | 大饞小子 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 招收生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)調(diào)劑 +4 | IceGuo 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | @MZB382400 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京工業(yè)大學(xué)，324分求調(diào)劑 +4 | 零八# 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | QiMing7 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 394求調(diào)劑 +3 | 好事多磨靜候佳?/a> 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +6 | 烤麥芽 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工考研調(diào)劑
+17
|
孅華 2026-03-22 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)/290求調(diào)劑/本科經(jīng)歷豐富/工科也可 +9 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 085602化學(xué)工程求調(diào)劑。
+4
|
平樂樂樂 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【2026考研調(diào)劑】制藥工程 284分 求相關(guān)專業(yè)調(diào)劑名額 +4 | 袁奐奐 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[有機(jī)交流]
有機(jī)合成求助
 20+3
|
FENGSHUJEI 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
材料考研調(diào)劑生
+3
|
黃粱一夢千年 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +7 | jhybd 2026-03-23 | 12/600 |
|