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知音者2新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
PCR出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，求高手解答
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體系：2xmix 12.5ul,引物（Im26-f,Im3r）各0.5ul，ddw10.5，模版200ng，1ul。程序94 5min，94 30s，56 30s，72 60s，72 7min，30個(gè)循環(huán)。出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，求高手解答 |
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lidonghong
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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9樓2012-08-27 10:13:37
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2樓2012-08-25 11:47:03
chenguestc
木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-08-25 20:12:08
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-08-25 20:12:08
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樓主，需要把你的PCR具體信息給出才好分析，例如，引物濃度，你的引物是如何設(shè)計(jì)的，目標(biāo)片段是多少等等，其次，你的PCR目的是什么，如果是為了做QPCR，非特異帶是絕對(duì)不允許的，如果只是做MAKRE倒是關(guān)系不大，如果是克隆基因或做表達(dá)，只克隆目標(biāo)就可以了，請(qǐng)說(shuō)明你的意圖。 其次，可以提高退火溫度，降低鎂離子濃度，加入適量DMSO提高特異性。 |
3樓2012-08-25 15:01:50
知音者2
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4樓2012-08-25 16:48:41
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