 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2641 | 回復(fù): 9 | |||
知音者2新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
PCR出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，求高手解答
|
|
體系：2xmix 12.5ul,引物（Im26-f,Im3r）各0.5ul，ddw10.5，模版200ng，1ul。程序94 5min，94 30s，56 30s，72 60s，72 7min，30個(gè)循環(huán)。出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，求高手解答 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有94人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- PCR失敗求高手指點(diǎn)�。。。。。。。�！
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 關(guān)于qPCR的幾個(gè)問(wèn)題，求解答
已經(jīng)有3人回復(fù)
- PCR產(chǎn)生非特異性帶
已經(jīng)有11人回復(fù)
- PCR標(biāo)準(zhǔn)體系有關(guān)問(wèn)題。。求高手解答
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 大片段PCR擴(kuò)增求助
已經(jīng)有34人回復(fù)
- PCR高手請(qǐng)進(jìn)，小女子有事相求，我剛來(lái)金幣不要嫌少啊，我只有這么多啊，全給你了
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 連接后轉(zhuǎn)化子PCR出現(xiàn)非特異性的條帶
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 連接轉(zhuǎn)化后菌落PCR驗(yàn)證出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 真菌ITS序列PCR擴(kuò)增 求助
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 向RTPCR高手求助，關(guān)于RTPCR的空白對(duì)照問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助】關(guān)于引物非特異性的問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】有引物二聚體、非特異性擴(kuò)增帶是怎么回事？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR后沒(méi)有目的條帶，有非特異性條帶，求解決辦法？？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR沒(méi)有結(jié)果，希望高手指教
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光PCR擴(kuò)增曲線問(wèn)題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】為什么PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度比設(shè)計(jì)時(shí)的要長(zhǎng)很多？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR擴(kuò)增后沒(méi)有條帶是怎么回事?
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教Western blot出現(xiàn)非特異性條帶的怎么解決
已經(jīng)有8人回復(fù)
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
2樓2012-08-25 11:47:03
chenguestc
木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 7
- 應(yīng)助: 576 (博士)
- 貴賓: 0.4
- 金幣: 4526.9
- 散金: 1639
- 紅花: 176
- 帖子: 4708
- 在線: 353.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1337860
- 注冊(cè): 2011-07-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 作物分子育種
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-08-25 20:12:08
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-08-25 20:12:08
|
樓主，需要把你的PCR具體信息給出才好分析，例如，引物濃度，你的引物是如何設(shè)計(jì)的，目標(biāo)片段是多少等等，其次，你的PCR目的是什么，如果是為了做QPCR，非特異帶是絕對(duì)不允許的，如果只是做MAKRE倒是關(guān)系不大，如果是克隆基因或做表達(dá)，只克隆目標(biāo)就可以了，請(qǐng)說(shuō)明你的意圖。 其次，可以提高退火溫度，降低鎂離子濃度，加入適量DMSO提高特異性。 |
3樓2012-08-25 15:01:50
知音者2
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 13.5
- 帖子: 12
- 在線: 4.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1955248
- 注冊(cè): 2012-08-25
- 專業(yè): 基因組學(xué)
4樓2012-08-25 16:48:41
5樓2012-08-26 00:00:15
aofeng860308
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 53 (初中生)
- 金幣: 3661.4
- 散金: 145
- 紅花: 5
- 帖子: 497
- 在線: 531.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 938003
- 注冊(cè): 2010-01-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境分析化學(xué)
6樓2012-08-26 13:13:50
xiayongxiu
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 11 (小學(xué)生)
- 金幣: 700.5
- 帖子: 369
- 在線: 136.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1052825
- 注冊(cè): 2010-07-06
- 專業(yè): 果樹學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助，很熱心哈 2012-08-27 13:42:37
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助，很熱心哈 2012-08-27 13:42:37
| 首先，確定你的非特異性帶是怎么來(lái)的，也就是簡(jiǎn)單地做一個(gè)無(wú)模板對(duì)照，一般做PCR最后做一個(gè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，看你的操作是否有誤或者試劑有無(wú)污染之類的，如果是你比較成熟的體系，可以不做對(duì)照，但是如果是剛開始一個(gè)新的程序，最好還是做個(gè)陰性對(duì)照，排除是水或者試劑的污染造成的非特性帶，然后才是看是否由于退火溫度引起的。一般情況下PCR的退火溫度要根據(jù)你的引物Tm值來(lái)確定，一般是比引物Tm值低3度左右，當(dāng)然有的高保真酶是要求比引物Tm值高；有非特異性條帶的另一種可能是你設(shè)計(jì)的引物剛好在基因組其他地方也能擴(kuò)增，也就是引物的特異性不是很好，你設(shè)計(jì)好引物后，可以先Blast一下。希望能幫助你。 |
7樓2012-08-26 19:20:51
Marado
金蟲 (正式寫手)
Dreamer
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 81 (初中生)
- 金幣: 1458.8
- 散金: 100
- 紅花: 1
- 帖子: 430
- 在線: 196.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1512351
- 注冊(cè): 2011-11-27
- 專業(yè): 生物化學(xué)
8樓2012-08-27 08:44:43
lidonghong
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 116 (高中生)
- 金幣: 2071.8
- 散金: 21
- 紅花: 2
- 帖子: 403
- 在線: 167.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1098160
- 注冊(cè): 2010-09-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
9樓2012-08-27 10:13:37
piaoyunokok
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 25 (小學(xué)生)
- 金幣: 3171.1
- 散金: 10
- 紅花: 2
- 帖子: 704
- 在線: 116.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 880952
- 注冊(cè): 2009-10-22
- 專業(yè): 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)
10樓2012-08-27 11:16:18
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 知音者2 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 281求調(diào)劑（0805） +6 | 煙汐憶海 2026-03-16 | 15/750 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +15 | 大米飯！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專利，省、國(guó)級(jí)證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +4 | 睿08 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 國(guó)自科面上基金字體 +6 | iwuli 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調(diào)劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070305求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中科大材料專碩319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +4 | z1z2z3879 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | Mochaaaa 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程調(diào)劑 +9 | 咪咪空空 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 一定有學(xué)上- 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 工科278分求調(diào)劑 +5 | 周慢熱啊 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +3 | S.H1 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +3 | d如愿上岸 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 福州大學(xué)楊黃浩課題組招收2026年專業(yè)學(xué)位博士研究生，2026.03.20截止 +3 | Xiangyu_ou 2026-03-12 | 3/150 |
|