 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » PET-30a 雙酶切
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2233 | 回復: 4 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
PET-30a 雙酶切
|
||
|
本人最近在做PET-30a的ECOR I 和NOT I的雙酶切，可是做了好多次都沒有成功，酶切后跑電泳仍是一條帶，不知道是什么問題出了錯，請高手指點下。 酶切體系如下： 5ul 質粒 1ul 10*H 1ul BSA 0.5ul ECOR I 0.5ul NOT I 2ul H2O 酶切條件嘗試過37度兩小時，37度三小時，還嘗試過37度過夜。 現(xiàn)在實驗無法繼續(xù)，跪求前輩指點，謝謝！ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有65人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
-
留學--博士招生
已經有16人回復
-
化學工程，本211，求調劑，ab區(qū)不限
已經有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調劑
已經有0人回復
-
湖北師范大學招調劑啦
已經有4人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 雙酶切后載體片段變小
已經有8人回復
- PET-32a雙酶切無法回收
已經有8人回復
- 雙酶切溫度控制
已經有7人回復
- 雙酶切連TA后切不開
已經有13人回復
- 十萬火急，重組質粒酶切只有一條帶，測序有結果，但反復說我質粒濃度很低
已經有16人回復
- 表達載體雙酶切
已經有9人回復
- 請教一下連接與轉化問題！
已經有11人回復
- 雙酶切的片段不見了？
已經有6人回復
- 雙酶切體系是什么意思
已經有7人回復
送鮮花一朵 
3樓2012-10-30 22:24:40
zhwenxing
木蟲 (著名寫手)
尛森蟲
- 應助: 11 (小學生)
- 貴賓: 0.005
- 金幣: 2189.8
- 散金: 50
- 紅花: 2
- 帖子: 1324
- 在線: 93.3小時
- 蟲號: 596551
- 注冊: 2008-09-09
- 專業(yè): 疫苗學
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+5, 鼓勵積極應助 2012-10-30 16:04:09
yu棒棒: 金幣+8, ★★★★★最佳答案 2012-10-30 22:24:46
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+5, 鼓勵積極應助 2012-10-30 16:04:09
yu棒棒: 金幣+8, ★★★★★最佳答案 2012-10-30 22:24:46
|
1、雙酶切，一般做：酶1單切，酶2單切，雙酶切，不酶切，跑膠時候能夠對照，甚至用另外一種常用的酶X單酶切，若X在插入片段有切點，而在載體上沒有切點，就能知道你連接進去啦； 2、不知樓主采用的是什么牌子的RE？是TaKaRa的嗎？Fermentas的快速酶切很好用；不論哪個牌子的，都可以。此常用載體不需要過夜酶切，時間長了還產生星活性呢！ 3、 “5 ul”質粒這種說法希望以后就別再出現(xiàn)了，質粒的濃度不一樣、大小不一樣，mol數(shù)量太模糊了！注意不要加入太多的質粒，再就是質粒洗脫時注意用量，去除乙醇等的影響。 4、 可PCR先檢測一下插入片段連進去了沒有？ 5、酶切體系不要擴大，雙酶切時候，酶的用量要減少，我一般是0.5-0.7ul足以，常用的這些RE活性了得。 嘗試一下吧~吼吼，希望對你有用。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
2樓2012-10-30 15:14:03
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學
4樓2012-10-31 08:16:02
5樓2013-06-18 22:18:14
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 環(huán)境工程297分求調劑一志愿杭高院 +3 | GENJIOW 2026-03-31 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調劑 +15 | Micky11223 2026-03-25 | 16/800 |
|
|
[考研] 285求調劑 +6 | AZMK 2026-03-30 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料科學與工程調劑 +12 | 深V宿舍吧 2026-03-30 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 282求調劑 +3 | 呼吸都是減肥 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學 ，080500材料科學與工程學碩 +5 | @taotao 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 看看我！301求調劑 081700 +3 | 一個小明同學 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 本2一志愿C9-333分，材料科學與工程，求調劑 +5 | 升升不降 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 335求調劑 +3 | 321* 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601一志愿西北工業(yè)大學初試346 +4 | 085601初試346 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085602化工求調劑（331分） +8 | 111@127 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 279求調劑 +12 | j的立方 2026-03-29 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +7 | 青春裁為三截 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工272求調劑 +21 | 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，321分求調劑 +5 | 大饞小子 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 11408軟件工程求調劑 +3 | Qiu學ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200-314 +3 | LILIQQ 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調劑 +8 | 小木蟲085600 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 274求調劑 +17 | 顧九笙要謙虛 2026-03-24 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|