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生化與分子新蟲 (初入文壇)
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[求助]
目的基因片段膠回收后酶切，然后再跑膠后發(fā)現(xiàn)條帶很弱，怎么改進(jìn)（求助）
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| 我要做目的基因的超表達(dá)，構(gòu)建載體的第一步就遇到了困難，我在克隆了目的基因跑膠后做雙酶切，然后再跑膠，發(fā)現(xiàn)目的條帶很弱，根本沒有回收的必要了，怎么改進(jìn)才能得到較亮的酶切條帶？請各位幫忙提點(diǎn)兒建議，不勝感激！ |
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4樓2012-10-31 11:06:14
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3樓2012-10-31 10:34:16
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-10-31 15:18:42
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-10-31 15:18:42
| 兩種解決方案：1.一般來說如果PCR產(chǎn)物是單一條帶的話，可以直接PCR產(chǎn)物回收，然后做雙酶切，這樣又簡單產(chǎn)率也很高而且可以避免更多的突變產(chǎn)生。如果你的目的基因是在文庫中拉的話那么其實(shí)第二步也可以直接產(chǎn)物回收的。2.如果擔(dān)心純度問題的話，最好還是割膠回收，但是呢，要加大PCR的量，而且在膠回收的過程中可以適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)，比如說膠回收在過柱子的過程中可以反復(fù)過濾3遍，提高產(chǎn)率，DDH2O少加一點(diǎn)，也可以的。 |
5樓2012-10-31 13:19:25
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