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[求助]
DNA含量多少才能在瓊脂糖凝膠上顯示出亮帶
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想問(wèn)下各位大蝦，DNA要上多少量才能在瓊脂糖上顯示出亮帶啊�？磎arker中最亮的750bp的dna50ng就很亮了，可是我的總dna用核酸測(cè)定儀測(cè)出來(lái)是110ng/ul，傷了5ul有550ng怎么跑電泳都沒(méi)見(jiàn)到亮帶呢，想問(wèn)下有哪些因素會(huì)影響亮帶的顯現(xiàn)，另外做過(guò)的一般上了多少含量的dna呢，希望各位有經(jīng)驗(yàn)的大蝦指點(diǎn)啊，感激不盡 |
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用了rna酶的，上次rna酶用的不夠，所以跑出來(lái)在100bp下面有拖帶，后面改進(jìn)了多加了些，拖帶不見(jiàn)了，但是板上什么也沒(méi)有，整個(gè)膠上有彌漫一點(diǎn)一點(diǎn)的小亮點(diǎn)，不知道是怎么回事，拍了照，但是由于像素不高，亮點(diǎn)在照片上顯示不出來(lái)，我沒(méi)加樣的涌到也出現(xiàn)一些小亮點(diǎn)，不知道是不是緩沖液用久了的原因，但marker是跑出來(lái)了，樣本dna是總細(xì)菌，應(yīng)該大于2000bp，我有加loadingbuffer的，就是感覺(jué)核酸測(cè)定儀測(cè)了有這么高的dna含量，可就不知道為什么跑不出來(lái)，我擴(kuò)增一次也看不到亮帶，第二輪擴(kuò)增才看到亮帶 |
4樓2012-11-27 15:19:44
czdaeq
銅蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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scelab: 金幣+6, xxjl 2012-11-29 14:03:23
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1、核酸檢測(cè)儀既可以檢測(cè)DNA也可以檢測(cè)RNA，不知道樓主的DNA有沒(méi)有用RNA酶消化吶？ 2、一般電泳時(shí)，還會(huì)加loading dye 并且用量比較隨意（嚴(yán)格來(lái)看，似乎要求DNA 5 ul：1 ul loading dye），所以電泳跑膠只能大概估計(jì)濃度，不知道樓主有么有考慮這點(diǎn)？ 3、我們這邊用得3K的marker，1、3、5k為亮條帶，貌似認(rèn)為是10ng/ul的量（這個(gè)一時(shí)也記不太清），所以應(yīng)該不用太高的濃度就可以看見(jiàn)的，樓主還是看看電泳以前的步驟有么有問(wèn)題吧  |
2樓2012-11-26 20:49:59
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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3樓2012-11-27 07:23:41
5樓2012-11-27 15:21:42
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