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DNA含量多少才能在瓊脂糖凝膠上顯示出亮帶
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想問下各位大蝦，DNA要上多少量才能在瓊脂糖上顯示出亮帶啊。看marker中最亮的750bp的dna50ng就很亮了，可是我的總dna用核酸測定儀測出來是110ng/ul，傷了5ul有550ng怎么跑電泳都沒見到亮帶呢，想問下有哪些因素會影響亮帶的顯現(xiàn)，另外做過的一般上了多少含量的dna呢，希望各位有經(jīng)驗(yàn)的大蝦指點(diǎn)啊，感激不盡 |
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cicelyzh
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7樓2012-11-28 08:05:41
czdaeq
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【答案】應(yīng)助回帖
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scelab: 金幣+6, xxjl 2012-11-29 14:03:23
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1、核酸檢測儀既可以檢測DNA也可以檢測RNA，不知道樓主的DNA有沒有用RNA酶消化吶？ 2、一般電泳時，還會加loading dye 并且用量比較隨意（嚴(yán)格來看，似乎要求DNA 5 ul：1 ul loading dye），所以電泳跑膠只能大概估計濃度，不知道樓主有么有考慮這點(diǎn)？ 3、我們這邊用得3K的marker，1、3、5k為亮條帶，貌似認(rèn)為是10ng/ul的量（這個一時也記不太清），所以應(yīng)該不用太高的濃度就可以看見的，樓主還是看看電泳以前的步驟有么有問題吧  |
2樓2012-11-26 20:49:59
cicelyzh
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3樓2012-11-27 07:23:41
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用了rna酶的，上次rna酶用的不夠，所以跑出來在100bp下面有拖帶，后面改進(jìn)了多加了些，拖帶不見了，但是板上什么也沒有，整個膠上有彌漫一點(diǎn)一點(diǎn)的小亮點(diǎn)，不知道是怎么回事，拍了照，但是由于像素不高，亮點(diǎn)在照片上顯示不出來，我沒加樣的涌到也出現(xiàn)一些小亮點(diǎn)，不知道是不是緩沖液用久了的原因，但marker是跑出來了，樣本dna是總細(xì)菌，應(yīng)該大于2000bp，我有加loadingbuffer的，就是感覺核酸測定儀測了有這么高的dna含量，可就不知道為什么跑不出來，我擴(kuò)增一次也看不到亮帶，第二輪擴(kuò)增才看到亮帶 |
4樓2012-11-27 15:19:44
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