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DNA含量多少才能在瓊脂糖凝膠上顯示出亮帶
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想問(wèn)下各位大蝦,DNA要上多少量才能在瓊脂糖上顯示出亮帶啊。看marker中最亮的750bp的dna50ng就很亮了,可是我的總dna用核酸測(cè)定儀測(cè)出來(lái)是110ng/ul,傷了5ul有550ng怎么跑電泳都沒(méi)見(jiàn)到亮帶呢,想問(wèn)下有哪些因素會(huì)影響亮帶的顯現(xiàn),另外做過(guò)的一般上了多少含量的dna呢,希望各位有經(jīng)驗(yàn)的大蝦指點(diǎn)啊,感激不盡 |
專家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +209 |

銅蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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1、核酸檢測(cè)儀既可以檢測(cè)DNA也可以檢測(cè)RNA,不知道樓主的DNA有沒(méi)有用RNA酶消化吶? 2、一般電泳時(shí),還會(huì)加loading dye 并且用量比較隨意(嚴(yán)格來(lái)看,似乎要求DNA 5 ul:1 ul loading dye),所以電泳跑膠只能大概估計(jì)濃度,不知道樓主有么有考慮這點(diǎn)? 3、我們這邊用得3K的marker,1、3、5k為亮條帶,貌似認(rèn)為是10ng/ul的量(這個(gè)一時(shí)也記不太清),所以應(yīng)該不用太高的濃度就可以看見(jiàn)的,樓主還是看看電泳以前的步驟有么有問(wèn)題吧 |
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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用了rna酶的,上次rna酶用的不夠,所以跑出來(lái)在100bp下面有拖帶,后面改進(jìn)了多加了些,拖帶不見(jiàn)了,但是板上什么也沒(méi)有,整個(gè)膠上有彌漫一點(diǎn)一點(diǎn)的小亮點(diǎn),不知道是怎么回事,拍了照,但是由于像素不高,亮點(diǎn)在照片上顯示不出來(lái),我沒(méi)加樣的涌到也出現(xiàn)一些小亮點(diǎn),不知道是不是緩沖液用久了的原因,但marker是跑出來(lái)了,樣本dna是總細(xì)菌,應(yīng)該大于2000bp,我有加loadingbuffer的,就是感覺(jué)核酸測(cè)定儀測(cè)了有這么高的dna含量,可就不知道為什么跑不出來(lái),我擴(kuò)增一次也看不到亮帶,第二輪擴(kuò)增才看到亮帶 |
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