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linsui1989新蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白表達(dá)不出來是怎么回事？
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我最近在做蛋白表達(dá)，重組質(zhì)粒測(cè)序正確，但是表達(dá)出來和空載體一模一樣，沒有目的帶，請(qǐng)問是怎么回事？ 我用的是pet32a載體，酶切位點(diǎn)是BamH1和Xhol1,誘導(dǎo)溫度是37度，IPTG濃度1mmol/L, 菌株為rosseta,全菌電泳 |
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Marado
金蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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從樓主的條件來分析，溫度，IPTG濃度都已經(jīng)挺高了，溫度試試降低一點(diǎn)看看，試試30攝氏度，27攝氏度之類的…… Rosseta本來就是用來表達(dá)稀有密碼子的受體細(xì)胞，一般來說很難表達(dá)的基因在Rosseta里面都可以表達(dá)的，你可以試試換下受體細(xì)胞，個(gè)人覺得Rosseta已經(jīng)是很強(qiáng)悍的受體細(xì)胞了. 再個(gè)就要從樓主的表達(dá)載體的構(gòu)建分析了，再仔細(xì)分析一下構(gòu)建好的表達(dá)載體，測(cè)序沒？把測(cè)序結(jié)果好好分析一下，確定一下啟動(dòng)子，跟閱讀框沒有出問題.實(shí)在不行換個(gè)表達(dá)載體吧，這是下下策了，換載體很多東西都要重新考慮，換個(gè)pGEX系列吧，GST融合表達(dá).  祝樓主好運(yùn) |
8樓2012-12-02 13:47:16
小河蝦
金蟲 (正式寫手)
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2樓2012-11-30 15:32:25
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xiefl1984 
木蟲 (小有名氣)
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4樓2012-11-30 16:37:08
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