版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜

返回列表

當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖

火舞精靈3

銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 4 (幼兒園)
金幣: 351.5
帖子: 524
在線: 164.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 994551

[交流] 連接！轉(zhuǎn)化！出問(wèn)題了�。。�！

我做的連接轉(zhuǎn)化，后提質(zhì)粒，利用T載體鑒定試劑盒檢測(cè)，如圖。
目的基因大約是2000bp，連接載體是Promoge載體pGEM-T載體，轉(zhuǎn)化菌株是JM109菌種
連接后，凍融法轉(zhuǎn)化JM109，涂Amp，IPTG, X-gal 平板。
問(wèn)題1. 出現(xiàn)了，平板全是白斑沒(méi)有藍(lán)斑�。。≒romoge載體自連很?chē)?yán)重，但卻沒(méi)有了，而且前段時(shí)間是有藍(lán)白斑的，就在這一個(gè)月沒(méi)有藍(lán)斑只有白斑，不但我的實(shí)驗(yàn)是這樣，整個(gè)實(shí)驗(yàn)室全是白斑，沒(méi)有藍(lán)斑）

問(wèn)題2. 我提質(zhì)粒顯示確是1500的條帶（載體大約3000bp），目的基因PCR檢測(cè)是空白，證明是空載體！！用T載體鑒定試劑盒檢測(cè)（SP6/T7引物檢測(cè)）的確是空載體（250bp左右），也同樣可以排除1500是細(xì)菌基因組DNA的可能性。

求解�。�！

212.jpg

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有288人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

3Kbp片段轉(zhuǎn)化連接問(wèn)題已經(jīng)有6人回復(fù)
求助-基因的突變文庫(kù)相關(guān)問(wèn)題已經(jīng)有7人回復(fù)
克隆出問(wèn)題了，大家?guī)兔Ψ治鱿?/a> 已經(jīng)有15人回復(fù)

雙酶切，連接，轉(zhuǎn)化問(wèn)題已經(jīng)有30人回復(fù)
為什么最近做連接轉(zhuǎn)化總是失敗已經(jīng)有20人回復(fù)
連接與轉(zhuǎn)化問(wèn)題已經(jīng)有5人回復(fù)
連接轉(zhuǎn)化問(wèn)題很煩呀。。已經(jīng)有14人回復(fù)
請(qǐng)教一下連接與轉(zhuǎn)化問(wèn)題！已經(jīng)有11人回復(fù)
連接轉(zhuǎn)化不成功問(wèn)題已經(jīng)有17人回復(fù)
目的基因連接pGEX-6p-1進(jìn)行轉(zhuǎn)化的問(wèn)題已經(jīng)有14人回復(fù)
膠回收產(chǎn)物連接轉(zhuǎn)化后菌液PCR電泳條帶出現(xiàn)問(wèn)題已經(jīng)有8人回復(fù)
【求助/交流】關(guān)于酶切連接轉(zhuǎn)化的問(wèn)題已經(jīng)有10人回復(fù)
【求助/交流】連接轉(zhuǎn)化時(shí)遇到的奇怪問(wèn)題求解已經(jīng)有12人回復(fù)
【求助/交流】連接轉(zhuǎn)化長(zhǎng)菌有質(zhì)粒，但是沒(méi)有目的片段，怎么回事？？已經(jīng)有20人回復(fù)
【求助/交流】請(qǐng)教連接轉(zhuǎn)化方面的問(wèn)題已經(jīng)有14人回復(fù)
【求助/交流】大片段連接轉(zhuǎn)化成功與否問(wèn)題已經(jīng)有11人回復(fù)
【求助/交流】藍(lán)白斑篩選什么也不長(zhǎng) 已經(jīng)有16人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2012-12-19 13:15:28

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

火舞精靈3

銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 4 (幼兒園)
金幣: 351.5
帖子: 524
在線: 164.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 994551

引用回帖:

12樓: Originally posted by liguanying at 2012-12-19 18:31:44
藍(lán)白斑問(wèn)題，4樓已經(jīng)說(shuō)了。關(guān)于，1500bp條帶，確實(shí)是空載體，因?yàn)樗黔h(huán)狀或超螺旋的，所以不可用線狀的標(biāo)準(zhǔn)去衡量。另外，樓主做的膠也有問(wèn)題啊，跑出來(lái)的圖太丑了，建議下次做膠時(shí)，融化后，對(duì)光看一下，確定里面 ...

那如果是環(huán)狀或是超螺旋，應(yīng)該比線性的小，總共加起來(lái)也不過(guò)6000bp

贊一下

回復(fù)此樓

16樓2012-12-20 10:56:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 25 個(gè)回答

笑笑天涯

木蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 3365.9
帖子: 239
在線: 86.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 276074

★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-12-19 17:26:14

左邊的Marker是lamda Hind3?
這個(gè)質(zhì)�？粗艽蟀�,為什么不拿酶單切下呢?
2kb稍稍有點(diǎn)大,但是還是連得上的,但是連接效率會(huì)低一點(diǎn)
連接不上的可能能也有,還要看連接酶效率

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2012-12-19 15:05:09

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

火舞精靈3

銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 4 (幼兒園)
金幣: 351.5
帖子: 524
在線: 164.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 994551

引用回帖:

2樓: Originally posted by 笑笑天涯 at 2012-12-19 15:05:09
左邊的Marker是lamda Hind3?
這個(gè)質(zhì)粒看著很大啊,為什么不拿酶單切下呢?
2kb稍稍有點(diǎn)大,但是還是連得上的,但是連接效率會(huì)低一點(diǎn)
連接不上的可能能也有,還要看連接酶效率

左邊Marker是LD15000

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2012-12-19 15:51:49

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

望海思月

銅蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 9 (幼兒園)
金幣: 87.8
帖子: 96
在線: 18.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1405350

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

是不是你們實(shí)驗(yàn)室IPTG, X-gal出問(wèn)題了，檢測(cè)不出來(lái)，恰好你挑的那幾個(gè)轉(zhuǎn)化子是空連的

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2012-12-19 16:21:19

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 25 個(gè)回答

普通表情龍兔虎貓高級(jí)回復(fù) (可上傳附件)

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 284求調(diào)劑 +10	Zhao anqi 2026-03-22	10/500	2026-03-24 00:08 by Equinoxhua
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +4	kotoko_ik 2026-03-23	5/250	2026-03-23 23:23 by 呆呆師姐
[考研] 081700 調(diào)劑 267分 +7	迷人的哈哈 2026-03-23	7/350	2026-03-23 23:19 by 星空星月
[考研] 材料292調(diào)劑 +4	橘頌思美人 2026-03-23	4/200	2026-03-23 23:16 by peike
[考研] 一志愿武理材料工程348求調(diào)劑 +6	￣^￣゜汗 2026-03-19	9/450	2026-03-23 19:53 by pswait
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +7	你好明天你好 2026-03-23	8/400	2026-03-23 18:39 by macy2011
[考研] 材料與化工考研調(diào)劑 +4	孅華 2026-03-22	4/200	2026-03-23 16:13 by 一休哥FU
[考研] 263求調(diào)劑 +6	yqdszhdap－ 2026-03-22	9/450	2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 291求調(diào)劑 +5	孅華 2026-03-22	5/250	2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 一志愿西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +3	晨昏線與星海 2026-03-20	3/150	2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 307求調(diào)劑 +3	余意卿 2026-03-18	3/150	2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 279求調(diào)劑 +5	紅衣隱官 2026-03-21	5/250	2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 南昌大學(xué)材料專碩311分求調(diào)劑 +6	77chaselx 2026-03-20	6/300	2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 299求調(diào)劑 +6	△小透明* 2026-03-17	6/300	2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 274求調(diào)劑 +10	S.H1 2026-03-18	10/500	2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 求調(diào)劑，一志愿:南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +4	@taotao 2026-03-19	4/200	2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 求調(diào)劑一志愿南京航空航天大學(xué)289分 +3	@taotao 2026-03-19	3/150	2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑有科研經(jīng)歷有二區(qū)文章 +22	rare12345 2026-03-18	22/1100	2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 材料學(xué)求調(diào)劑 +4	Stella_Yao 2026-03-20	4/200	2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4	lidianxing 2026-03-19	12/600	2026-03-20 12:25 by lidianxing