 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (736)
- >考研 (91)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (44)
- >導(dǎo)師招生 (32)
- >基金申請(qǐng) (14)
- >考博 (14)
- >論文投稿 (14)
- >碩博家園 (12)
- >教師之家 (11)
- >無(wú)機(jī)/物化 (5)
- >文獻(xiàn)求助 (5)
- >公派出國(guó) (5)
- >休閑灌水 (3)
- >招聘信息布告欄 (2)
- >論文道賀祈福 (2)
- >文獻(xiàn)求助完結(jié)子版 (2)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2255 | 回復(fù): 9 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
原核表達(dá)和SDS-PAGE
|
||
|
我做的4個(gè)基因的克隆 然后轉(zhuǎn)到pET-28a上了，然后進(jìn)行了一系列的檢測(cè)，都合適了，最后跑SDS-PAGE，具體操作如下： 將檢測(cè)合適的轉(zhuǎn)到BL21(DE3)里的保存的菌液 搖菌 37度過(guò)夜； 第二天，1:50的比例轉(zhuǎn)搖； OD600=0.6-0.8時(shí)停止轉(zhuǎn)搖（時(shí)間是下午2點(diǎn)）， 然后置于4度，待晚上7點(diǎn)加IPTG誘導(dǎo)，28度，過(guò)夜（體積為20ml） 次日，將誘導(dǎo)好的，沒(méi)有誘導(dǎo)的，離心，收集上清，并將沉淀加滅過(guò)菌的水稀釋至總體積為20ml,然后超聲波處理 然后跑SDS-PAGE， 濃縮膠為4% 分離膠為12% 結(jié)果什么都沒(méi)有 不知道為什么 文獻(xiàn)上看別人都是這樣做的啊 為什么我的就是不行呢？ 麻煩大家?guī)兔Ψ治鲆幌拢?br /> 謝謝！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有286人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 做過(guò)跨膜蛋白原核表達(dá)的戰(zhàn)友過(guò)來(lái)看看哦
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 原核表達(dá)形成了包涵體怎么辦��？
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 原核表達(dá) PET-30載體 目的蛋白分子量偏小？
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 有關(guān)蛋白表達(dá)的問(wèn)題
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 漢譯英 生物學(xué)方向
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 原核表達(dá)中SDS-PAGE上樣量如何確定？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 原核表達(dá)菌液裂解
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 推薦一本很實(shí)用的入門教材：分子生物學(xué)與基因工程實(shí)驗(yàn)教程
已經(jīng)有27人回復(fù)
- 膜蛋白表達(dá)問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 原核表達(dá)SDS-PAGE問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助 原核表達(dá)WB 多條帶
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助】真核基因在原核生物表達(dá)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助】 關(guān)于原核表達(dá)【有效日期截止：2011年2月28日】
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】含咪唑的蛋白免疫兔子
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】原核表達(dá)蛋白純化
已經(jīng)有29人回復(fù)
3樓2013-01-08 21:02:29
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 什么都沒(méi)有是什么意思？SDS-PAGE染膠沒(méi)有條帶嗎？還是說(shuō)沒(méi)有誘導(dǎo)出特異的條帶？確定超聲破碎的效果了嗎？如果菌破了，總會(huì)有細(xì)菌自己的蛋白吧。超聲所得的蛋白是可溶蛋白，有可能誘導(dǎo)的蛋白形成包涵體了�？梢栽囋嚿霞�(xì)菌總蛋白，看有沒(méi)有誘導(dǎo)出來(lái)。此外，IPTG誘導(dǎo)條件（溫度、時(shí)間、濃度）都和蛋白有關(guān)，需要自己優(yōu)化。單純按文獻(xiàn)來(lái)是不行的。 |
2樓2013-01-08 14:50:15
snoopyzxx
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- MolEPI: 4
- 應(yīng)助: 49 (小學(xué)生)
- 金幣: 3232.6
- 散金: 1266
- 紅花: 43
- 帖子: 2256
- 在線: 276.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 548497
- 注冊(cè): 2008-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 全球變化生態(tài)學(xué)
4樓2013-01-08 21:25:54
酶切專家
金蟲(chóng) (小有名氣)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 96 (初中生)
- 金幣: 1610.8
- 紅花: 4
- 帖子: 149
- 在線: 41.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1648414
- 注冊(cè): 2012-02-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
你用的是Novagen的pET系統(tǒng)，建議你參考pET系統(tǒng)操作手冊(cè)，這可能是做原核表達(dá)最經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)手冊(cè)。 http://lifeserv.bgu.ac.il/wb/zar ... system%20manual.pdf 里面有關(guān)于pET系統(tǒng)的表達(dá)，純化等相關(guān)的具體信息，祝好運(yùn)！ |
5樓2013-01-08 21:49:17
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求化學(xué)調(diào)劑 +5 | wulanna 2026-03-28 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 冬十三 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +9 | Koxui 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703 調(diào)劑 306分 一志愿211 +7 | 26要上岸 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +10 | 鈕恩雪 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 初試270分 求調(diào)劑 +8 | 谷雨上岸 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 數(shù)一英一271專碩（085401）求調(diào)劑，可跨 +7 | 前行必有光 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703本科鄭州大學(xué)求調(diào)劑 +3 | nhj_ 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | 丟掉懶惰 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +7 | 嗯滴的基本都 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +7 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | Ymlll 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +7 | prayer13 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
材料調(diào)劑
 5+4
|
想要一壺桃花水 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院-光纖傳感課題組招生-中國(guó)科學(xué)院大學(xué)、深圳理工大學(xué)聯(lián)培 +5 | YangTyu1 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求調(diào)劑 +4 | gdlf9999 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +4 | L when 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +3 | yanzhixue111 2026-03-23 | 6/300 |
|