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[求助]
原核表達和SDS-PAGE
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我做的4個基因的克隆 然后轉(zhuǎn)到pET-28a上了，然后進行了一系列的檢測，都合適了，最后跑SDS-PAGE，具體操作如下： 將檢測合適的轉(zhuǎn)到BL21(DE3)里的保存的菌液 搖菌 37度過夜； 第二天，1:50的比例轉(zhuǎn)搖； OD600=0.6-0.8時停止轉(zhuǎn)搖（時間是下午2點）， 然后置于4度，待晚上7點加IPTG誘導，28度，過夜（體積為20ml） 次日，將誘導好的，沒有誘導的，離心，收集上清，并將沉淀加滅過菌的水稀釋至總體積為20ml,然后超聲波處理 然后跑SDS-PAGE， 濃縮膠為4% 分離膠為12% 結(jié)果什么都沒有 不知道為什么 文獻上看別人都是這樣做的啊 為什么我的就是不行呢？ 麻煩大家?guī)兔Ψ治鲆幌拢?br /> 謝謝！ |
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snoopyzxx
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4樓2013-01-08 21:25:54
cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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你用的是Novagen的pET系統(tǒng)，建議你參考pET系統(tǒng)操作手冊，這可能是做原核表達最經(jīng)典的實驗手冊。 http://lifeserv.bgu.ac.il/wb/zar ... system%20manual.pdf 里面有關(guān)于pET系統(tǒng)的表達，純化等相關(guān)的具體信息，祝好運！ |
5樓2013-01-08 21:49:17
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