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周志惠新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
確定連接時(shí)載體，片段的加入量
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2013-01-15 09:26:14, 4.9 M
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cicelyzh
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2樓2013-01-15 09:58:27
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-01-15 11:53:36
1949stone: MolEPI+1, good 2013-01-15 19:43:13
周志惠: 金幣+8, ★★★很有幫助 2013-01-16 10:04:25
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周志惠: 金幣+8, ★★★很有幫助 2013-01-16 10:04:25
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首先，你得切膠回收，回收載體的5.7kb,還有片段的2kb。 片段如果是以質(zhì)粒為模板PCR出來(lái)的，還要講模板用限制性?xún)?nèi)切酶去消化，破壞模板的環(huán)狀質(zhì)粒。 然后，再做T4酶連接，具體量： 載體：片段=5:1---10:1，總體積不要超過(guò)10ul。 具體載體和片段的按照：1pmol 1000bp DNA=0.66ug去算，體積就是除以你回收后的濃度。 再加上等倍的酶去連接，再轉(zhuǎn)化。 |
3樓2013-01-15 10:21:11
周志惠
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5樓2013-01-15 16:09:58
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