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周志惠新蟲 (小有名氣)
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[求助]
確定連接時(shí)載體，片段的加入量
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| 請(qǐng)各位幫忙確定一下連接體系，載體和片段的加入量，電泳圖如下，載體是5.7kb,片段是2kb,T4連接酶，16℃ |
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2013-01-15 09:26:14, 4.9 M
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周志惠
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4樓2013-01-15 14:36:27
cicelyzh
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2樓2013-01-15 09:58:27
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【答案】應(yīng)助回帖
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首先，你得切膠回收，回收載體的5.7kb,還有片段的2kb。 片段如果是以質(zhì)粒為模板PCR出來的，還要講模板用限制性內(nèi)切酶去消化，破壞模板的環(huán)狀質(zhì)粒。 然后，再做T4酶連接，具體量： 載體：片段=5:1---10:1，總體積不要超過10ul。 具體載體和片段的按照：1pmol 1000bp DNA=0.66ug去算，體積就是除以你回收后的濃度。 再加上等倍的酶去連接，再轉(zhuǎn)化。 |
3樓2013-01-15 10:21:11
cicelyzh
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5樓2013-01-15 16:09:58
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