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[求助]
western-blot求助，急急急！！求指點(diǎn)求建議！！！
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做了兩個(gè)月了，剛開(kāi)始沒(méi)一點(diǎn)信號(hào)后來(lái)好不容易有信號(hào)了可是整個(gè)泳道都亮，發(fā)帖有親們說(shuō)是上樣量太大還有親說(shuō)2抗?jié)舛忍�，結(jié)果做了上樣量梯度和抗體濃度梯度都沒(méi)有什么改善，上圖幾張希望懂的親們細(xì)心看完給予指點(diǎn)……7個(gè)不同的處理不要求目標(biāo)條帶，就看不同處理蛋白質(zhì)表達(dá)量的不同，染過(guò)轉(zhuǎn)膜后的膠基本沒(méi)問(wèn)題，第一張是每孔上35μL樣品，二抗1：40，第二張是做的上樣量梯度從左到右依次是30μL、25μL、20μL、15μL、10μL、5μL、2μL上樣量最小的2個(gè)都沒(méi)信號(hào)，10微升的又是沒(méi)條帶的地方也亮 第三張圖是2抗?jié)舛忍荻茸筮吺?:80，中間1:100，最右邊1:200后邊2個(gè)濃度干脆就沒(méi)信號(hào)了……我實(shí)在是走投無(wú)路不知道該腫么辦，封閉25°搖床一個(gè)小時(shí)一抗4°過(guò)夜，PBS/T洗4次每次15分鐘，二抗25°一個(gè)半小時(shí)PBS/T洗4次每次15分鐘……求指點(diǎn)��！ dell 2013-01-16 dell 2013-01-18 12 小時(shí) 08 分鐘_Exposure_116.8sec.jpg dell 2013-01-21 12 小時(shí) 56 分鐘_Exposure_180.0sec.jpg |
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