 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2133 | 回復(fù): 3 | |||
[求助]
釀酒酵母的電轉(zhuǎn)方法
|
|
想請教一下釀酒酵母和畢赤酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)的制備有什么區(qū)別嗎？ 我們實驗室只有釀酒酵母，可是我只找到了畢赤酵母感受態(tài)的制備方式，不知道能不能通用呢？ 一下是畢赤酵母感受態(tài)的制備方法： 1)在含 5mlYPD 的 50ml 離心管中，培養(yǎng)畢赤酵母，30 度過夜 2)取 0.1-0.5ml 過夜培養(yǎng)物，接種含 500ml 新鮮培養(yǎng)基的 2L 搖瓶，過夜生長至 OD600＝1.3-1.5 3)4 度，1500g離心 5min收集細(xì)胞，用 500ml預(yù)冷的滅菌水懸浮細(xì)胞 4)如上離心，用 250 ml預(yù)冷的滅菌水懸浮細(xì)胞 5)如上離心，用 20ml預(yù)冷的 1M山梨醇懸浮細(xì)胞 6)如上離心，用 1 ml 預(yù)冷的1M山梨醇懸浮細(xì)胞，至終體積約1.5ml 注意：可凍存80ul 等量的電感受態(tài)細(xì)胞，但轉(zhuǎn)化效率會下降很多 小女子先謝謝各位大神了��！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實驗經(jīng)驗積累 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有56人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 畢赤酵母電轉(zhuǎn)請教
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 釀酒酵母的ORF與啟動子、終止子
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 畢赤酵母電轉(zhuǎn)化問題求助
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 待電轉(zhuǎn)的釀酒酵母多少OD合適？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 如何在釀酒酵母中進(jìn)行功能鑒定
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 釀酒酵母接種到發(fā)酵培養(yǎng)基時的OD值大概應(yīng)為多少？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于畢赤酵母電轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 求助一個關(guān)于釀酒酵母轉(zhuǎn)化的問題
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 釀酒酵母 搖瓶問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 釀酒酵母轉(zhuǎn)化建立突變庫
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 重組釀酒酵母轉(zhuǎn)化子篩選的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 急求釀酒酵母的電轉(zhuǎn)感受態(tài)制備方法和轉(zhuǎn)化方法
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 親們~誰做過釀酒酵母的轉(zhuǎn)化，怎么篩選陽性克隆呢？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 20金幣 求助關(guān)于釀酒酵母的放大培養(yǎng)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 酵母原生質(zhì)體點轉(zhuǎn)化用多大的電壓啊？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助畢赤酵母電轉(zhuǎn)化問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】釀酒酵母URA3基因敲除的問題
已經(jīng)有30人回復(fù)
- 【求助/交流】酵母表達(dá)和原核表達(dá)，在技術(shù)上有什么不同？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】管囊酵母和釀酒酵母
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】釀酒酵母表達(dá)載體的構(gòu)建問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】釀酒酵母drop-out的配置~~
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】求助釀酒酵母轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 電轉(zhuǎn)化注意事項
已經(jīng)有14人回復(fù)
greenhope3371
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 1986.5
- 散金: 76
- 紅花: 4
- 帖子: 414
- 在線: 150.5小時
- 蟲號: 644321
- 注冊: 2008-11-03
- 專業(yè): 植物生理與生化
2樓2013-03-26 14:44:26
cory0931
至尊木蟲 (文壇精英)
巫山云
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.101
- 金幣: 30146.9
- 散金: 13861
- 紅花: 198
- 帖子: 10478
- 在線: 1003.5小時
- 蟲號: 1652657
- 注冊: 2012-02-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 臨床獸醫(yī)學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
qing1220(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖應(yīng)助！ 2013-04-27 14:52:31
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
qing1220(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖應(yīng)助！ 2013-04-27 14:52:31
|
我后期也計劃采用畢赤酵母表達(dá)，個人覺得值得一試； 另外附上復(fù)旦大學(xué)一哥們學(xué)位論文中的一段描述，粘貼有個別字跡錯誤，最好自己下載原文參考； 《同源重組技術(shù)在釀酒酵母表達(dá)載體構(gòu)建中的應(yīng)用》 2004年 酵母LiAC轉(zhuǎn)化法[421 接種釀酒酵母單菌落在3mLYEPD培養(yǎng)基中30。C，250rpm振蕩培養(yǎng)過夜。 將過夜培養(yǎng)物稀釋轉(zhuǎn)接到50mLYEPD培養(yǎng)基中，使得細(xì)胞密度為5×106個／n1L。 30。C、250rpm培養(yǎng)5～7hr，使得細(xì)胞培養(yǎng)至2×107個／mL(細(xì)胞在此期叫繁殖兩 代)，5，000rpm、5min離心收集菌體。棄上清，用20mL無菌水懸浮菌體。 5,000rpm、5rain離心收集菌體。棄上清，將菌體懸浮于10mL 0．1M LiAC中， 30。C水浴10rain。5，000rpm、5min離心收集菌體。棄上清，加入1 mL 0．IM LiAC， 混勻，使得細(xì)胞終濃度為1×109個／mL(此即為制備好的感受態(tài)細(xì)胞)。 吸取100I_tL 菌體到一個無菌Eppendorf管中，離心沉淀細(xì)胞，用微量移液器吸去LiAC。加 入下列轉(zhuǎn)化混合物：2409L 50％PEG，361aL LiAC，101aL 10rag／mE ssDNA(臨用 前應(yīng)在沸水中煮5分鐘，然后立即置于冰上以變性ssDNA)，10此轉(zhuǎn)化DNA(轉(zhuǎn) 化質(zhì)粒DNA用量為0．5pg、重組轉(zhuǎn)化DNA包括線形化載體片段llxg和目的基因 或目的基因表達(dá)單元PCR片段，PCR片段用量為載體片段摩爾比的6倍【261)， 補(bǔ)水至總體積為360pL。30℃水浴30min，42℃水浴20rain。10，000叩m，30s離 心，用微量移液器吸去上清，加100“L無菌水涂布選擇性平板。30℃靜置培養(yǎng) 2~3天。 |
3樓2013-03-26 14:57:26
冰藝于欣然
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1762.8
- 帖子: 110
- 在線: 12.2小時
- 蟲號: 1551546
- 注冊: 2011-12-26
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
4樓2014-03-29 09:23:17
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 qing1220 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 286分人工智能專業(yè)請求調(diào)劑愿意跨考！ +3 | lemonzzn 2026-03-17 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)071000，求調(diào)劑 +3 | 沿岸有貝殼6 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
[考研] 初始318分求調(diào)劑（有工作經(jīng)驗） +3 | 1911236844 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 280求調(diào)劑 +7 | 咕嚕曉曉 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +6 | www_q 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑材料與化工專碩 +15 | 陌の森林 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 申子申申 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩297已過四六級求調(diào)劑推薦 +11 | adaie 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +12 | 梁梁校校 2026-03-19 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 08工學(xué)調(diào)劑 +5 | 用戶573181 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 素年祭語 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|